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本试验以小鼠和猪的囊胚为试验材料,对其玻璃化冷冻保存体系进行了研究。试验内容包括:1)小鼠囊胚和扩张囊胚的玻璃化冷冻保存的研究;2)小鼠囊胚和扩张囊胚冷冻后线粒体聚集的研究;3)猪超数排卵的研究;4)猪囊胚和扩张囊胚的玻璃化冷冻保存的研究。本试验通过小鼠胚胎的玻璃化冷冻保存及冷冻后线粒体聚集的研究,旨在为猪胚胎的冷冻保存进行初步的探索,也为猪胚胎玻璃化冷冻保存的研究积累经验并提供借鉴。研究结果如下: 1 小鼠囊胚和扩张囊胚的玻璃化冷冻保存的研究 本试验以6M甘油+6.5%PVP(V1)和8MEG+7%PVP(V2)为玻璃化溶液,采用细管法和OPS一步法对小鼠囊胚进行冷冻。结果表明:胚胎在玻璃化液中平衡20S存活率显著高于平衡60S后的存活率(P<0.05)。V1和V2玻璃化冷冻溶液对囊胚冷冻后的发育率没有显著的影响(P>0.05)。在细管一步法冷冻保存的囊胚,用不同解冻程序对胚胎解冻后发育率进行研究,结果表明:蔗糖四步法解冻后的发育率与蔗糖三步法冷冻解冻后的发育率差异不显著(P>0.05),但两种方法均显著高于蔗糖两步法解冻后的发育率(P<0.05)、 冷冻方法冷冻对解冻后胚胎的体外发育率有一定的影响。本研究表明:用OPS三步法冷冻后(V2)的小鼠囊胚的体外发育率显著高于细管法和OPS一步法冷冻后的发育率(P<0.01)。 在OPS三步法冷冻过程中,平衡时间对胚胎冷冻后的发育率有一定的影响。采用V1溶液进行OPS三步法冷冻时,胚胎在25%的V1溶液中平衡10-15分钟后的发育率显著高于平衡20分钟后的发育率(P<0.05);胚胎在2M的V2溶液中平衡3-4分钟后的发育率显著高于平衡5分钟后的发育率(P<0.05)。 此外,试验还比较了冷冻阶段对胚胎冷冻后发育率的影响。结果表明,发育阶段对的胚胎的体外发育率无显著的影响(P>0.05)。 2 小鼠胚胎线粒体聚集的研究 用罗丹明123荧光分子探针对玻璃化冷冻后小鼠胚胎线粒体的损伤进行了研究。将V1冷冻的囊胚和V2冷冻的扩张囊胚解冻后,将胚胎在体外进行培养,分别在0h、4h、8h、12h、18h和24h观察线粒体的损伤情况,结果表明无论是用V1溶液还是用V2溶液对胚胎进行玻璃化冷冻,随着培养时间的延长,线粒体的正常聚集率均呈现