论文部分内容阅读
目的：有研究表明肺癌细胞株miR-185表达明显降低，其抑制细胞周期，促进细胞分化的机制尚不明确。生物信息学分析发现控制细胞周期的周期素依赖性激酶6(cyclin dependent kinase6,CDK6)基因可能是miRNA-185调控细胞生物学行为的靶基因。CDK6是细胞周期素依赖激酶的一种，在G1/S期转换中正性调控细胞增殖。然而，肺腺癌细胞中miR-185及CDK6表达状况如何，两者表达的相关性及其在肺腺癌发生、发展过程中的作用，miR-185对肺腺癌增殖的影响，尚不清楚。本实验将对上述问题进行初步探讨，为阐明miR-185调控肺癌细胞周期、细胞生长以及转移的机制提供一定的依据。方法：培养人肺腺癌细胞A549、正常呼吸道上皮细胞株(BEAS-2B)。以内参基因U6为基准，通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测两种细胞株中miR-185的表达；以内参GAPDH为基准，荧光实时定量PCR技术检测CDK6基因mRNA表达水平的变化。分析miR-185/CDK6基因在两种细胞中表达的差异，计算互相之间的关系。将A549细胞分为转染miRNA的阴性对照组、空白组和miR-185的mimics组。④利用MTT实验观察miR-185对A549细胞生长的影响。结果：依据qRT-PCR结果分析显示：A549组miR-185相对表达量（0.866±0.313）明显低于BEAS-2B组（2.450±1.579），差异有统计学意义（P<0.05）；而CDK6mRNA在A549中表达水平（2.058±1.482）明显高于BEAS-2B（1.032±0.548），差异有统计学意义（P<0.05）；Pearson相关性分析发现A549细胞中miR-185的表达水平与CDK6mRNA的含量呈负相关（r=-0.887，P<0.01）。MTT结果显示：对照组、空白组及mimics组的A549细胞在24h、48h、72h、96h时的相对吸光度值分别为0.68±0.03、1.34±0.23、1.89±0.05、2.26±0.06；0.67±0.541.46±0.231.93±0.122.56±0.13和0.65±0.14、0.75±0.08、1.27±0.31、1.67±0.28。从转染48h后，各时间点阴性对照组和空白组A549细胞的存活数明显多于mimics组，差异具有统计学意义（P<0.05~0.001）。结论：在肺腺癌中存在miR-185表达降低和CDK6表达增高，二者的表达水平的高低对评估肺癌的恶性程度具有指导意义。miR-185表达的异常降低可导致肺腺癌细胞CDK6表达和增殖活性增强。增加外源性miR-185可有效下调肺腺癌细胞CDK6表达并抑制其增殖，故把miR-185应用于肺腺癌的基因治疗有重要的意义。