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目的通过提高GPI-PLD酶活性,增加细胞膜上GPI锚定蛋白质如CD87,ephrin-Al分子的释放数量,观察解锚定效应是否能够降低HepG2细胞的侵袭和肿瘤血管拟态生成的能力,为肿瘤治疗提出新的抗肿瘤转移和抗血管生成方案。方法用阳离子聚合物将本室已经构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)/GPI-PLD转入HepG2细胞,以未转染的HepG2细胞组、转染空载体pcDNA3.1(+)的细胞组为对照,用G418筛选出阳性细胞克隆。RT-PCR法鉴定GPI-PLD基因的mRNA表达水平,利用自制的具完整GPI结构的胎盘型碱性磷酸酶(PLAP)做底物,定量检测GPI-PLD酶活性。ELISA检测各组细胞CD87的释放情况,流式细胞术检测细胞表面GPI锚定的CD87分子的变化；免疫细胞化学结合western blot鉴定ephrin-A 1的膜表面表达情况。以transwell方法检测CD87,ephrin-Al对HepG2细胞侵袭能力的影响；采用基质胶构建HepG2细胞株的三维培养模型,进行PAS染色观察是否形成血管样结构。结果RT-PCR法测定表明稳定转染GPI-PLD后,未转染组和转染空质粒组的GPI-PLD基因的mRNA表达水平明显低于GPI-PLD转染组的表达水平(P<0.05).GPI-PLD转染组细胞的GPI-PLD酶活性明显高于未转染组和转染空质粒组细胞的酶活性。GPI-PLD转染组的GPI-PLD活性达到14.24±6.27%,而其它组细胞GPI-PLD(?)舌性极低,分别为6.92±4.34%和8.36±5.63%,具有统计学意义(P<0.05)。ELISA法检测GPI-PLD转染组的CD87在培养基上清的浓度为4.18±0.95pg/ml,其他两组分别为1.48±0.76 pg/ml和1.84±0.63 pg/ml,差异有统计学意义(P＜0.05)。流式细胞术分析各组细胞膜上GPI锚定的CD87分子均显阳性,但GPI—PLD转染组平均荧光强度的数值比其他两组要小。GPI-PLD转染组平均荧光强度为0.62±0.110,而其他两组分别为1.91±0.130和1.86±0.091,差异有显著性意义(P＜0.01)。免疫细胞化学、western-blot结果显示GPI—PLD转染组的ephrin-Al的表达量和其他两组相比明显减少(P<0.05).Transwell方法显示GPI-PLD的解锚定作用能减弱HepG2细胞的体外侵袭能力,GPI-PLD转染组侵袭力较未转染组和转染空质粒组分别降低30.6%、27.3%,统计有显著性差异(P<0.01)。HepG2细胞血管拟态三维培养结果观察,在接种后三天,未转染组和转染空质粒组呈现镶嵌样生长,出现网络样结构,而GPI-PLD转染组细胞均匀弥散生长；7天后,经PAS染色观察,未转染组和转染空质粒组可见明显的环状PAS阳性图案,而GPI-PLD转染组阳性图案不明显。结论稳定转染的GPI-PLD的HepG2细胞株能使GPI-PLD过度表达并使其GPI-PLD活性显著性增加。与此同时,细胞表面锚定的CD87、ephrin-Al的分子数量均显著减少。GPI-PLD可降低人肝癌HepG2细胞株细胞的体外侵袭能力和血管拟态生成能力,其机制与CD87、Ephrin-Al被GPI-PLD解锚定有关。