【摘 要】
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目的:孤雌激活(parthenogenetic activation)是指处于第二次减数分裂中期(MⅡ期)的成熟卵母细胞不经过精子受精作用,而在某些理化因素的刺激下继续生长发育的过程。巯基乙酸(th
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目的:孤雌激活(parthenogenetic activation)是指处于第二次减数分裂中期(MⅡ期)的成熟卵母细胞不经过精子受精作用,而在某些理化因素的刺激下继续生长发育的过程。巯基乙酸(thioglycolic acid,TGA)作为冷烫精的主要成分,在美容行业中有着广泛的应用。有报道称,TGA可影响小鼠、大鼠、非洲爪蟾的卵母细胞成熟,但是有关TGA对卵母细胞孤雌激活影响的研究很少。本研究旨在阐明TGA对非洲爪蟾卵母细胞孤雌激活中若干细胞学事件的影响,同时还探讨TGA对孤雌激活过程中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated proteinkinase,MAPK)和成熟促进因子(maturation promoting factor,MPF)信号的影响。
方法:体外孕酮诱导爪蟾卵母细胞成熟,选取MⅡ期细胞用不同浓度TGA(0、5、25、125μg/ml)处理2 h,用钙离子载体A23187诱导激活,在加入激活剂后不同时间(0、10、20、30、60min)记录激活的卵母细胞数量,计算其激活率;加入激活剂后60min收集卵母细胞,进行荧光染色观察原核形成情况;采用WesternBlotting检测CyclinB2、Mos、p-ERK1/ERK1的表达,探讨可能的激活机制。
结果:本研究结果表明,不同浓度的TGA均降低非洲爪蟾卵母细胞的孤雌激活率,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);激活后细胞外观观察,对照组卵母细胞在动物极中央形成一个圆形的受精斑,而TGA125μg/ml处理后形成的受精斑形状不规则且周围毛糙不齐:荧光染色发现对照组细胞中有清晰的原核形成,而TGA125μg/ml处理组则未发现;Western Blotting分析结果显示,TGA处理可以抑制CyclinB2、Mos、p-ERK1在孤雌激活时的降解。
结论:TGA处理可以抑制钙离子载体A23187诱导的非洲爪蟾卵母细胞孤雌激活,作用机制可能与其干扰了成熟促进因子(MPF)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在孤雌激活时正常的降解有关。
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