【摘 要】
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目的探究黄芪甲苷（Astragaloside Ⅳ,ASⅣ）对低氧诱导小鼠肺动脉高压的保护作用,并深入研究其潜在作用机制,为低氧性肺动脉高压（hypoxia-induced pulmonary hypertension,HPH）的治疗寻找靶点并提供治疗方向。方法体内实验:40只C57BL/6野生小鼠随机分为5组,分别为常氧对照组、低氧模型组、低氧NF-κB抑制剂组（BAY11-7082,5 mg·k
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目的探究黄芪甲苷（Astragaloside Ⅳ,ASⅣ）对低氧诱导小鼠肺动脉高压的保护作用,并深入研究其潜在作用机制,为低氧性肺动脉高压（hypoxia-induced pulmonary hypertension,HPH）的治疗寻找靶点并提供治疗方向。方法体内实验:40只C57BL/6野生小鼠随机分为5组,分别为常氧对照组、低氧模型组、低氧NF-κB抑制剂组（BAY11-7082,5 mg·kg-1）、低氧ASⅣ低剂量组（40 mg·kg-1）、低氧ASⅣ高剂量组（80 mg·kg-1）;16只calpain-1敲除鼠随机分为两组:常氧calpain-1敲除组、低氧calpain-1敲除组。将涉及低氧的小鼠放置于含10%氧气的低氧舱内持续性低氧造模28天。低氧造模结束后测定小鼠右心室收缩压（right ventricular systolic pressure,RVSP）,右心室肥厚指数（right heart hypertrophy index,RVHI）;酶联免疫法（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）检测血清中炎症因子ET-1、IL-6、TNF-α含量;苏木素-伊红（hematoxylin-eosin staining,HE）染色观察肺动肺小动脉结构的变化,测量肺小动脉血管面积占总面积的百分比（WA%）和血管厚度占血管外径的百分比（WT%）;免疫组化（immunohistochemistry,IHC）观察肺组织PCNA蛋白的阳性表达率;免疫蛋白印迹法（Western blot）检测肺组织calpain-1、p65、p-p65、PCNA、VCAM1、ICAM1蛋白表达水平。体外实验:人肺动脉内皮细胞（HPAECs）在含有10%胎牛血清的DMEM培养基（含1%青霉素和链霉素）中培养,分为常氧对照组、低氧模型组、低氧MDL28170组（10μmol·L-1）、低氧BAY11-7082组（10μmol·L-1）、低氧ASⅣ低剂量组（10μmol·L-1）、低氧ASⅣ中剂量组（50μmol·L-1）、低氧ASⅣ高剂量组（100μmol·L-1）。常氧对照组放置于二氧化碳细胞培养箱中,其余组在二氧化碳细胞培养箱24 h,分别加入抑制剂和药物后放入低氧培养箱（3%O2、97%N2）中,继续培养24 h。造模结束后,ELISA法检测细胞中ET-1、IL-6、TNF-α的含量;Western blot法检测细胞中calpain-1、p65、p-p65蛋白表达水平。结果体内实验:与常氧对照组比较,低氧模型组小鼠的RVSP、RVHI、WA%和WT%升高（P＜0.01）;血清中炎症因子ET-1、IL-6、TNF-α含量升高（P＜0.01）;肺小动脉管腔变小,管壁中层平滑肌增厚;肺组织中calpain-1、p-p65、PCNA、VCAM1、ICAM1蛋白表达显著升高（P＜0.05）;与低氧模型组相比,低氧calpain-1敲除组、低氧NF-κB抑制剂组、低氧黄芪甲苷给药组小鼠的RVSP、RVHI、WA%和WT%显著降低（P＜0.01）;血清中ET-1、IL-6、TNF-α含量显著降低（P＜0.05）;肺小动脉管腔变大,管壁中层平滑肌增厚减轻;肺组织中calpain-1、p-p65、PCNA、VCAM1、ICAM1蛋白水平表达降低（P＜0.05）。体外实验:与常氧对照组比较,低氧模型组细胞中ET-1、IL-6、TNF-α的含量升高（P＜0.01）;细胞中calpain-1,p-p65蛋白表达水平显著升高（P＜0.01）;与低氧模型组相比,低氧MDL28170组、低氧BAY11-7082组、低氧ASⅣ给药（中、高剂量）组的ET-1、IL-6的含量显著降低（P＜0.05）,低氧calpain-1抑制剂组、低氧NF-κB抑制剂组、低氧ASⅣ给药组的TNF-α的含量显著降低（P＜0.05）;细胞中calpain-1,p-p65蛋白水平的表达降低（P＜0.05）。结论黄芪甲苷对低氧诱导的小鼠肺动脉高压具有保护作用:（1）黄芪甲苷可以降低体内和体外低氧诱导肺动脉高压炎症因子的表达;（2）黄芪甲苷改善体内低氧诱导肺动脉高压小鼠的血管内皮功能障碍和肺小动脉平滑肌增殖;（3）黄芪甲苷可能通过calpain-1/NF-κB信号通路对低氧诱导的小鼠肺动脉高压发挥保护作用。
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