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目的基于Rho A/ROCK1信号通路,研究丹酚酸B（salvianolic acid B,Sal B）对糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及其作用机制。方法细胞水平:取1~3 d新生Sprague-Dawley（SD）大鼠乳鼠,差速贴壁培养心肌成纤维细胞（cardiac fibroblast,CFs）,实验用2~4代细胞。实验分为:Control组（5.5 mmol·L-1葡萄糖）、HG组（25 mmol·L-1葡萄糖）、HG+Sal B组（25μmol·L-1 Sal B+25 mmol·L-1葡萄糖）、HG+Y-27632组（10μmol·L-1 ROCK抑制剂Y-27632+25 mmol·L-1葡萄糖）以及HG+Y-27632+Sal B组（10μmol·L-1ROCK抑制剂Y-27632+25μmol·L-1 Sal B+25 mmol·L-1葡萄糖）。倒置显微镜下观察CFs生长状态,波形蛋白（Vimentin）免疫荧光法检测CFs纯度。CCK-8检测不同浓度葡萄糖（5.5、10、20、25、30 mmol·L-1）、不同时间（12、24、48 h）诱导对CFs活力的影响,确定高糖诱导CFs的浓度及时间;同时应用不同浓度Sal B（12.5、25、50μmol·L-1）干预,确定Sal B最佳给药浓度。免疫荧光法检测CFs内Rho A蛋白表达;Western蛋白印迹法检测CFs内α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ、Rho A、ROCK1蛋白表达水平。在体水平:选取体重在250±20 g的SD大鼠50只,40只尾静脉一次性注射30 mg·kg-1链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）,制备糖尿病大鼠模型。将糖尿病大鼠随机分为糖尿病组（DM）、DM+Sal B（80 mg·kg·d-1）组、DM+Sal B（120 mg·kg·d-1）组、DM+Sal B（160 mg·kg·d-1）组,各10只。同时设立正常对照组（Control）,饲养12 W。12 W末,检测大鼠血糖,计算各组大鼠心脏质量指数;天狼星红染色检测各组大鼠左室心肌胶原纤维表达的情况;Western蛋白印迹法检测各组大鼠左室心肌中α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达水平。结果细胞水平:（1）细胞形态学观察及免疫学鉴定:倒置显微镜下,CFs呈不规则三角形及梭形,且无自发性搏动,含有1~3个细胞核,核较大,胞浆呈透明无色,生长迅速;Vimentin蛋白免疫荧光呈强阳性反应。（2）CCK-8检测结果显示:与Control组相比,25 mmol·L-1葡萄糖诱导CFs24 h,CFs细胞活力显著增强（P＜0.01）,确定高糖诱导浓度为25 mmol·L-1葡萄糖作用24 h。与HG组相比,经不同浓度Sal B（12.5、25、50μmol·L-1）干预,CFs活力均出现抑制作用（P＜0.05）,25μmol·L-1 Sal B给药组已具有极显著性差异（P＜0.01）,确定后续实验Sal B给药浓度为25μmol·L-1。（3）免疫荧光检测结果显示:Rho A蛋白呈现红色荧光,与Control组相比,HG组CFs红色荧光明显增强,与HG组相比,HG+Sal B和HG+Y-27632组CFs红色荧光减弱,HG+Y-27632+Sal B组红色荧光减弱更加明显。（4）Western蛋白印迹结果显示:与Control相比,HG组CFs内α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ、Rho A、ROCK1蛋白表达明显升高（P＜0.01）;与HG组相比,HG+Sal B和HG+Y-27632组CFs内α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ、Rho A、ROCK1蛋白表达降低,HG+Y-27632+Sal B组降低更为显著（P＜0.01）。在体水平:（1）血糖检测结果显示:与Control组比,DM组大鼠血糖明显升高（P＜0.01）;不同剂量Sal B组血糖无明显变化（P＞0.05）。（2）心脏质量指数测定结果显示:与Control组比,DM组大鼠12 W时心脏质量指数明显升高（P＜0.01）;与DM组比较,Sal B不同剂量组心脏质量指数明显下降（P＜0.01）,且呈剂量依赖性,提示病程12 W时糖尿病大鼠已出现心肌肥厚,Sal B可抑制糖尿病大鼠心肌肥厚。（3）天狼星红染色结果显示:显微镜下胶原纤维显示为红色,与Control组相比,DM组大鼠左室心肌组织胶原表达明显增多（P＜0.01）,与DM组相比,Sal B不同剂量组大鼠左室心肌组织内胶原表达明显减少（P＜0.01）,且呈剂量依赖性。（4）Western蛋白印迹结果显示:与Control组相比,DM组大鼠左室心肌α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达明显升高（P＜0.01）,与DM组相比,Sal B不同剂量组大鼠左室心肌α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达显著降低（P＜0.01）,且呈剂量依赖性。结论（1）高糖可引起CFs增殖及纤维化,Rho A、ROCK1参与了其发展过程。Sal B能下调Rho A、ROCK1表达,抑制高糖培养CFs增殖及纤维化。（2）Sal B对糖尿病大鼠心肌纤维化具有抑制作用,其作用与抑制Rho A/ROCK1通路,下调Rho A、ROCK1表达有关。