肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是常见的泌尿系统恶性肿瘤之一,简称肾癌,其发病率在泌尿系肿瘤中仅次于膀胱癌据第二。随着人们生活方式和饮食习惯的不断改变,。肾癌的发病率和死亡率有逐年上升的趋势。肾癌起病隐匿,早期症状多不为患者所注意。一旦出现腰痛、血尿等症状或触及腹部包块时大多已属于晚期,5年存活率不足50%,其预后具有不可预测性。肾癌的以手术治疗为主,对放、化疗不敏感,免疫治疗的价值亦很有限。随着现代分子和细胞生物学技术的发展,人们认识到肾癌的发生和发展是多阶段、多步骤的复杂过程,涉及到许多肿瘤相关因子。Caveolin-1(小窝蛋白1)是一种新发现的与肿瘤形成、生长和凋亡密切相关的重要因子,近年来对其生物学功能的研究成为热点。Caveolin-1是细胞膜表面caveolae(胞膜窖)形成特异性穴样内陷的微区结构所必需,是分子量为21～24kD的膜整合蛋白。已有大量的证据表明caveolin-1可能执行肿瘤抑制基因的功能,但其具体的作用机制仍未完全明了。目前国内外关于caveolin-1在肾癌中表达情况的文献报道甚少,其与肾癌发生、发展、浸润和转移的关系尚需要进一步明确。Survivin(存活素)是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein)家族的新成员,其组织分布具有明显的细胞选择性。在正常成人已分化的成熟组织(胸腺、生殖腺除外)不表达,而在人类多种肿瘤组织中均有表达。Survivin参与抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的过程,其作用于各个凋亡途径的交汇点,抑制由caspase-3和caspase-7过度表达而诱发的凋亡。研究报道survivin在肺癌、肝癌及结肠直肠癌中高表达,被认为与这些肿瘤的不良预后有关。还有学者认为survivin可以作为新发生或复发性膀胱癌敏感的诊断方法之一。而当前有关survivin与肾癌相关性的报道不多,其与肾癌发生和预后的关系亦需要进一步阐明。肾细胞癌的发生与发展受到多种基因的调控。本研究旨在通过检测caveolin-1及survivin蛋白在肾癌各种病理亚型、各临床分期和不同组织学分级组的表达情况,分析他们与肾癌临床生物学行为的关系和两种蛋白表达之间的相关性。从而了解肾癌恶性转化及浸润和转移的分子学机制,寻找与肾癌相关的有价值的生物学标示,为肾癌的临床诊断和治疗提供新的理论和方法。材料与方法1.收集标本:收集郑州大学2005年6月～2007年6月手术切除的95例肾细胞癌标本和14例距离肿瘤边缘＞5 cm的正常肾组织。95例肾癌中肾透明细胞癌74例,乳头状细胞癌9例,嫌色细胞癌11例,集合管癌1例。所有患者术前均未行放疗、化疗和介入栓塞治疗。其中90例行根治性肾切除术,5例行肾部分切除术。95例肾癌中临床Ⅰ期52例,Ⅱ期24例,Ⅲ期11例,Ⅳ期8例,伴区域淋巴结转移4例,肝转移1例,肺及肋骨转移1例。组织学分级:高分化组48例,中分化组32例,低分化组15例。2.实验方法:采用免疫组织化学PV-9000法检测caveolin-1和survivin蛋白在95例肾细胞癌的手术切除标本和14例正常肾组织中表达的情况。3.统计学分析:所有数据采用SPSS 10.0软件进行统计学处理。各组间率的比较采用χ~2检验或Fisher’s精确概率法。各指标表达的相关性采用Spearman相关分析。以a=0.05为检验显著性水准。结果1.Caveolin-1蛋白在正常肾和肾癌组织的阳性表达率分别为100%(14/14)和38.9%(37/95),二者之间差异有统计学意义(P＜0.05)。Caveolin-1蛋白在肾透明细胞癌、乳头状细胞癌、嫌色细胞癌中阳性表达率分别为39.2%(29/74)、33.3%(3/9)和36.4%(4/11),三组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。1例集合管癌表达阳性(未比较)。2.Caveolin-1蛋白在肾癌高、中、低分化组中的阳性表达率分别为12.5%(6/48)、65.6%(21/32)和66.7%(10/15),差异有统计学意义(P＜0.05)。其中,中分化组和低分化组阳性表达率显著高于高分化组,而中分化组和低分化组之间差异无统计学意义。3.Caveolin-1蛋白在肾癌临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组中的阳性表达率分别为25.0%(13/52)、33.3%(8/24)、81.8%(9/11)和87.5%(7/8),差异有统计学意义(P＜0.05)。其中Ⅲ组和Ⅳ组阳性表达率均显著高于Ⅰ组和Ⅱ组,而Ⅲ组和Ⅳ组以及Ⅰ组和Ⅱ组之间差异无统计学意义。4.Survivin蛋白在正常肾和肾癌的阳性表达率分别为0%(0/14)和68.4%(65/95),二者之间差异有统计学意义(P＜0.05)。Survivin蛋白在肾透明细胞癌、乳头状细胞癌、嫌色细胞癌中阳性表达率分别为68.9%(51/74)、66.7%(6/9)和63.6%(7/11),三组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。1例集合管癌表达阳性(未比较)。5.Survivin蛋白在肾癌高、中、低分化组中阳性表达率分别为45.5%(22/48)、90.6%(29/32)和93.3%(14/15),差异有统计学意义(P＜0.05)。其中,中分化组和低分化组阳性表达率显著高于高分化组,而中分化组和低分化组之间差异无统计学意义。6.Survivin蛋白在肾癌临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期组中的阳性表达率分别为57.7%(30/52)、70.8%(17/24)、90.9%(10/11)和100%(8/8),差异有统计学意义(P＜0.05)。其中Ⅲ组和Ⅳ组阳性表达率均显著高于Ⅰ组和Ⅱ组,而Ⅲ组和Ⅳ组以及Ⅰ组和Ⅱ组之间的差异无统计学意义。7.局限性肾癌(临床Ⅰ、Ⅱ期组)组织中caveolin-1和survivin蛋白表达之间呈负相关(r~s=—0.665,P＜0.05)。在局部进展性和转移性肾癌(临床Ⅲ、Ⅳ期)组织中caveolin-1和survivin蛋白均高表达,二者呈正相关(r~s=0.563,P＜0.05)。结论1.Caveolin-1在肾组织正常表达,在肾癌组织表达且与肾癌分期和分级密切相关,但存在双向表达模式。即在低分级、低分期肾癌中caveolin-1低表达,可能发挥着肿瘤抑制基因的作用;随肾癌分级、分期的升高,caveolin-1表达重新升高,可能发挥肿瘤促进基因的作用。这提示caveolin-1可作为肾癌检测的生物学指标。2.Survivin在正常肾组织无表达,在肾癌组织高表达,其表达与肾癌分期和分级密切相关,而与肾癌病理分型无关。提示其在肾癌的发生和发展中起着促进作用,同样可作为肾癌检测的生物学指标。3.Caveolin-1和survivin在局限性肾癌组织中表达呈负相关,而在局部进展性肾癌和转移性肾癌中呈正相关。二者的联合检测对于判断肾细胞癌预后可能具有重要意义。