【摘 要】
：
目的:在针刺镇痛的动物实验中,首先建立在清醒无束缚大鼠上实施手针针刺的方法,其次探究穴区机械敏感性TRPA1与TRPV4蛋白在针刺镇痛外周机制中的作用。方法:在探索动物预处理方法的实验中,Sprague-Dawley大鼠随机分为（1）空白对照组、（2）疼痛模型组、（3）清醒无束缚治疗组、（4）束缚治疗组、（5）麻醉治疗组,每组6-12只。在探索针刺镇痛穴位机制的实验中,大鼠分为:（1）空白对照组、
【基金项目】
：
国家自然科学基金No.81574076；
论文部分内容阅读
目的:在针刺镇痛的动物实验中,首先建立在清醒无束缚大鼠上实施手针针刺的方法,其次探究穴区机械敏感性TRPA1与TRPV4蛋白在针刺镇痛外周机制中的作用。方法:在探索动物预处理方法的实验中,Sprague-Dawley大鼠随机分为（1）空白对照组、（2）疼痛模型组、（3）清醒无束缚治疗组、（4）束缚治疗组、（5）麻醉治疗组,每组6-12只。在探索针刺镇痛穴位机制的实验中,大鼠分为:（1）空白对照组、（2）空白+穴位注射（钆/钌红/TRPA1抑制剂/TRPV4抑制剂）组、（3）疼痛模型组、（4）针刺治疗组、（5）针刺+穴位注射（钆/钌红/TRPA1抑制剂/TRPV4抑制剂）组、（6）模型+足底生理盐水注射组、（7）模型+足底注射（钆/钌红/TRPA1抑制剂/TRPV4抑制剂）组,每组4-9只。随后探究穴区ATP水平与针刺镇痛的相关实验中,大鼠分为（1）空白对照组、（2）空白+穴位注射（Apyrase/ARL67156）组、（3）疼痛模型组、（4）针刺治疗组、（5）针刺+穴位注射（Apyrase/ARL67156）组,每组6-8只。除空白对照组外,其余各组均在治疗前48 h于左侧踝关节行完全弗氏佐剂注射,建立急性炎性痛模型。穴位注射在针刺前20 min进行,试剂分层注射到左侧足三里穴位的肌肉层和皮肤层。足底皮下注射于造模48 h后进行。针刺组大鼠左侧足三里接受单次20 min手针针刺。左侧足底机械痛阈、热痛阈和自主行为用以反应疼痛状态。痛阈检测在造模前、针刺前和针刺后检测;自主行为仅在针刺后检测。最后,取正常大鼠足三里穴区肌肉和皮肤进行TRPA1与TRPV4蛋白的免疫荧光蛋白检测。结果:1.与空白组相比,造模后大鼠机械痛阈及热痛阈显著降低（P均＜0.001）。针刺后,与模型组相比,各治疗组的机械痛阈（P均＜0.001）都显著升高,同时清醒无束缚组热痛阈（P＜0.001）、麻醉组和束缚组的热痛阈（P均＜0.01）也显著升高。2.清醒无束缚组、麻醉组和束缚组之间,以清醒无束缚组的机械痛阈（P＜0.05,vs束缚组;P＜0.01,vs麻醉组）和热痛阈（P＜0.01,vs束缚组和麻醉组）的改善最为显著,其次是束缚治疗组。3.与空白组相比,造模后自主行为的活动总路程（P＜0.01）和爬壁次数（P＜0.001）均降低,针刺后仅爬壁次数较模型组有升高（P＜0.05）。4.穴位注射广谱机械敏感性蛋白抑制剂钆（1 m M,20μL）和钌红（0.5 m M,20μL）,与针刺组相比,钆可以显著抑制针刺对热痛阈（P＜0.05）的缓解作用,钌红则显著抑制针刺对机械痛阈（P＜0.001）和热痛阈（P＜0.01）的改善作用。5.与针刺组相比,穴位注射TRPA1蛋白特异性抑制剂HC030031（0.5 m M,20μL）可显著抑制针刺的镇痛效应（机械痛阈P＜0.001,热痛阈P＜0.001）;此外,足底注射该抑制剂能显著改善模型大鼠的热痛阈（P＜0.001）。6.与针刺组相比,穴位注射TRPV4特异性抑制剂HC067047（0.2 m M,20μL）可以显著抑制针刺的镇痛效应（机械痛阈P＜0.001,热痛阈P＜0.001）;此外,足底注射该抑制剂能显著改善模型大鼠的机械痛阈（P＜0.01）。7.免疫荧光检测显示TRPA1与TRPV4蛋白在足三里穴区皮肤层肌肉层均有表达。8.与针刺组相比,穴位注射ATP水解酶抑制剂ARL67156（0.1 m M,50μL）可以显著抑制针刺对模型大鼠机械痛阈（P＜0.001）和热痛阈（P＜0.01）的升高作用。穴位注射ATP水解酶Apyrase（10单位,50μL）不会进一步提高针刺镇痛的效应。结论:1.与麻醉和束缚处理相比,本研究践行的清醒无束缚状态的大鼠能更好地反映针刺镇痛的效应。此外,本研究证明传统痛阈指标比自主行为指标更能反映针刺的镇痛效应,并且对样本量的要求较低。2.TRPA1和TRPV4蛋白在穴区与在疼痛局部发挥的作用不同,穴区TRPA1与TRPV4蛋白参与针刺镇痛的机制,疼痛局部TRPA1与TRPV4则作为疼痛相关蛋白参与痛觉传递。3.本研究表明穴区胞外ATP水平与针刺镇痛效应有关,ATP水解是针刺发挥镇痛作用的重要环节。
其他文献
【目的】茵陈蒿汤（YCHT）是治疗湿热黄疸的经典方剂,因此茵陈蒿汤及其变方也被广泛的运用到酒精性肝病的肝胆湿热证临床治疗中,但其防治酒精性脂肪肝病（AFLD）的肝脏损伤和分子机制尚未阐明。因此,我们基于已有文献报道,利用网络药理学和RNA seq转录组学,并结合体内外实验探讨茵陈蒿汤改善酒精性脂肪肝病小鼠肝脂肪变性和肝损伤的分子机制。【方法】一、网络药理学:通过TCMSP收集并筛选茵陈蒿汤有效成分
目的:急性肝衰竭是发生极为迅速,预后极差的肝脏疾病,目前未有对患者起到有效作用的治疗方法。根据前期研究,我们认为张仲景所著《伤寒论》麻黄连翘赤小豆汤证可能为急性重症黄疸,即急性肝衰竭。麻黄和连翘共为该方剂的君药,传统认为麻黄连翘这组药对具有发汗解表,清热解毒的作用。伪麻黄碱是麻黄与连翘中最为特异的有效成分,连翘精油是连翘的精油提取物。我们改进了麻黄连翘这组药对,将伪麻黄碱以及连翘精油作为复方制剂,
目的:采用随机对照的试验设计以客观评价针刺治疗糖尿病周围神经病变的临床疗效,为临床实践提供科学的证据。方法:本研究将在上海中医药大学附属龙华医院内分泌门诊及住院病房招募到的符合糖尿病周围神经病变诊断及纳入标准的患者,以1:1的比例随机分配到真针刺组和安慰针刺组,二者均接受内分泌科对糖尿病周围神经病变患者的基础治疗,在此基础之上真针刺组进行针刺治疗,安慰针刺组进行假针刺治疗,每周2次,共12周。两组
目的:脑卒中是在世界范围导致死亡和成人残疾的主要原因之一,主要分为缺血性和出血性两大类。我国最常见的卒中亚型是缺血性卒中,但目前对其治疗方法非常有限。环黄芪醇（Cycloastragenol,CAG）是从黄芪中分离提取的一种次生代谢产物,具有多种药理学作用。研究表明,环黄芪醇能够激活端粒酶、调节免疫力,对心血管疾病、脂肪肝、腹主动脉瘤等疾病模型均具有保护作用。本课题在小鼠脑缺血损伤模型中研究CAG
目的:利用体内外帕金森病（Parkinson’s disease,PD）模型探讨伴侣蛋白L-异天冬氨酸甲基转移酶（Protein L-isoaspartate-methyltransferase,PIMT）功能异常对α-突触核蛋白（α-synuclein,α-Syn）神经毒性的影响及羟基积雪草苷（Madecassoside,MA）的保护作用;进一步确认内质网应激、自噬失衡和micro RNAs（m
目的:观察10.6μm激光灸对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长和转移的抑制作用,从PD-1/PD-L1通路研究10.6μm激光灸提高抗肿瘤免疫的效应与机制,为灸法在肿瘤免疫治疗中的应用提供科学依据。方法:将Lewis肺癌细胞悬液注射于C57BL/6小鼠右腋下制备Lewis肺癌模型（简称模型组）,在此基础上予10.6μm激光灸治疗（简称激光灸组）,同时设立正常对照组（简称正常组）。激光灸组予10.6μm激
目的:探讨迷迭香酸（rosmarinic acid,RA）通过影响补体3/补体3 a受体（Complement 3/Complement 3a receptor,C3/C3a R）信号表达调控小胶质细胞激活和神经炎症反应对阿尔茨海默症（Alzheimer disease,AD）小鼠记忆障碍的作用及其药理机制。方法:（1）在体内实验中,采用SPF级3月龄Presenilin 1/2条件性双基因敲除（
目的:桂附地黄丸组方出自张仲景《金匮要略》肾气丸,具有补肾助阳、化气利水的功用,现代临床用于治疗前列腺增生效果甚佳,但因成分复杂所以机制研究受到限制。本文立足于前列腺增生的病因研究进展,通过网络药理学结合体内外药理学研究桂附地黄丸治疗前列腺增生的作用及作用机制,为中药的临床合理应用提供科学依据,以及为治疗前列腺增生可能的作用靶点提供新思路。方法:1.利用ADME参数筛选、成分的靶点预测与疾病靶点交
目的:通过临床量表和功能磁共振（f MRI）探讨延年九转法干预慢性疲劳综合征（CFS）的临床疗效和脑功能的改变。方法:采用随机对照的临床研究方法,纳入符合标准的CFS患者90例,健康受试者45例。将90例CFS患者按照随机数字表分为功法组（n=45）和教育组（n=45）,分别进行3个月延年九转法练习和认知行为疗法。研究以多维疲劳量表（MFI-20）、匹兹堡睡眠质量指数（PSQI）、焦虑抑郁量表（H
目的:疼痛是一种包括感觉、情感和认知三个层面的不愉快的感受。慢性痛患者会伴随着长期不同程度的情绪变化和认知障碍（比如抑郁和焦虑）。慢性痛的缓解或镇痛效应会产生愉悦感,被认为是一种奖赏,能激活大脑的奖赏系统,而改善疼痛相关情绪变化。针刺镇痛的奖赏效应及正性情绪是针刺镇痛中调神畅志作用的重要体现,因此,研究针刺缓解慢性痛的奖赏效应有着重要的临床和科学意义。已有的研究表明前额皮层（主要在前额皮层的腹侧区