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目的探究肿瘤坏死因子受体GITR是否可以作为较CD25更好的表面标志物用于鉴定Treg,尝试建立体外扩增CD4+Treg的方法。方法选取2-3周、8-10周、40-48周不同年龄段的BALB/c和C57BL/6小鼠,利用流式细胞术检测胸腺及脾脏细胞CD3、CD4、CD25及GITR分子的表达;流式分选C57BL/6小鼠脾脏细胞中CD4+CD25-细胞群作为实验组,全脾脏细胞作为对照组,以抗CD3/CD28刺激活化,同时给予TGF-β、IL-2进行诱导,共同培养4天后,用流式细胞仪检测培养细胞中CD4+CD25+Treg细胞比例;流式分选CD3+CD4+CD25+、CD3+CD4+GITR+、CD3+CD4+GITR-、CD3+CD4+CD25+GITR+细胞群,并进行Fox P3染色分析;同时用免疫印迹（Western blot,WB）方法检测两组细胞Foxp3蛋白的表达水平,并与未激活诱导的C57BL/6小鼠脾脏细胞（空白组）Foxp3表达水平进行比较;RT-PCR检测Foxp3在这三组细胞中m RNA的表达水平。结果FCM结果显示,2-3周、8-10周、40-48周龄的BALB/c和C57BL/6小鼠胸腺和脾脏的T淋巴细胞中CD4+CD25+和CD4+GITR+细胞群占比相近,其中成年组小鼠各细胞群占比更高,老年组较其他两组比例有所下降（P＜0.05）,虽然总的来说在BALB/c和C57BL/6两种品系小鼠之间两群细胞占比略有差异,但成年期C57BL/6小鼠脾脏中两种分子表达更为相近也更稳定。两群细胞经Fox P3染色可见细胞群集体偏移,CD25、GITR染色信号有所丢失。FCM检测CD4+CD25-细胞（实验组）、全脾细胞（对照组）及未经任何诱导处理的C57BL/6小鼠脾脏细胞（空白组）中Fox P3胞内染色结果示:实验组＞对照组＞空白组,且实验组与对照组分别与空白组有较大差异（P＜0.05,P＜0.01）。其中实验组诱导所得CD3+CD4+CD25+、CD3+CD4+GITR+细胞阳性率在90%以上,远高于对照组。流式分选CD3+CD4+CD25+、CD3+CD4+GITR+、CD3+CD4+GITR-、CD3+CD4+CD25+GITR+细胞群时,两组中除CD3+CD4+CD25+GITR+外,其它群所得细胞数极少。通过Western blot检测CD3+CD4+CD25+GITR+群Foxp3蛋白在实验及对照组细胞中的表达,并以天然空白组做质量控制的参考,结果呈现:实验组＞对照组＞空白组,其中各组Fox P3蛋白表达与空白组相比均有所升高,差异具有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。RT-PCR检测Foxp3的m RNA表达示实验组＞对照组＞空白组,其中对照组与实验组相差不大,而对照组和实验组分别与空白组相差较大（P＜0.05,P＜0.01）。结论肿瘤坏死因子受体GITR与CD25表达具有高度一致性,可作为Treg的表面标志物之一。以抗CD3/CD28刺激活化,同时给予TGF-β、IL-2对CD4+CD25-细胞进行体外诱导可以获得高于全脾细胞体外诱导所获得的有效Treg体外增殖,其功能及稳定性有待进一步研究。