【摘 要】
：
第一部分:高灵敏多重微滴式数字PCR检测SARS-CoV-2目的:RT-qPCR作为SARS-CoV-2核酸检测的金标准,在低病毒载量的样本经常被误诊为假阴性,目前急需更准确、更灵敏的方法。因此本实验拟建立一种多重dd PCR检测并定量SARS-CoV-2的方法。方法:采用基于探针混合和振幅多路复用的多重dd PCR方法,同时检测并定量N1、ORF1ab和RNase-P基因。并对反应条件进行优化如
论文部分内容阅读
第一部分:高灵敏多重微滴式数字PCR检测SARS-CoV-2目的:RT-qPCR作为SARS-CoV-2核酸检测的金标准,在低病毒载量的样本经常被误诊为假阴性,目前急需更准确、更灵敏的方法。因此本实验拟建立一种多重dd PCR检测并定量SARS-CoV-2的方法。方法:采用基于探针混合和振幅多路复用的多重dd PCR方法,同时检测并定量N1、ORF1ab和RNase-P基因。并对反应条件进行优化如:探针浓度,引物浓度,退火温度,延伸时间和循环次数。最后检测其灵敏度、特异性和线性动态范围。结果:本实验成功建立优化并验证了一种三重dd PCR检测SARS-CoV-2的方法,与RT-qPCR相比较其在检测低病毒载量的样本方面具有显著性差异（P＜0.05）。dd PCR检测N1、ORF1ab的LOQ分别为2.81、5.75 copies/reaction,LOD分别为1.38、1.58 copies/reaction。结论:研究表明,通过结合探针混合和基于幅度的多路复用,开发多重dd PCR检测方法是可行的,此外dd PCR在检测SARS-CoV-2低病毒载量样本更敏感,可作为RT-qPCR诊断疑似患者的一种补充方法。第二部分:漱咽液样本用于检测SARS-CoV-2目的:快速、准确的检测SARS-CoV-2对于控制当前的COVID-19大流行至关重要。目前RT-qPCR检测鼻咽拭子是检测SARS-CoV-2的金标准,但漱咽液标本可能是一种可行性的替代诊断样本。方法:使用之前建立的多重dd PCR方法检测漱咽液中的SARS-CoV-2,同时对COVID-19患者的鼻拭子、咽拭子、肛拭子以及漱咽液样本的检测效果进行了评估比较。此外,使用0.1%SDS溶液处理聚丙烯容器表面验证其是否会减少对样本核酸的吸附性。结果:本实验成功验证了漱咽液样本中可以检出SARS-CoV-2,其检测效果与鼻拭子相当,明显优于咽拭子和肛拭子。此外经过0.1%SDS溶液处理后的聚丙烯容器表面后会减少对核酸的吸附性,可以提高对低病毒载量样本的检出率。结论:漱咽液样本易于采集、无创且节省个人防护装备,此外,它们可以在患者与医护人员不密切接触的情况下获得,从而降低了医护人员的感染风险。必要时期可以作为替代诊断的样本。第三部分:废水中SARS-CoV-2的检测及其在社区监测中的应用目的:建立废水中检测SARS-CoV-2的方法。废水中监测SARS-CoV-2可作为监测SARS-CoV-2在社区传播的工具,估计无症状和症状感染者的传播,并预测即将到来的疫情。方法:采用负离子膜吸附洗脱技术对污水中的核酸进行浓缩。另外建立并优化多重dd PCR方法对污水样本中的SARS-CoV-2进行检测及定量。结果:本实验建立优化并验证了一种多重dd PCR方法同时检测并定量SARS-CoV-2的N1和E基因以及PMMo V基因。dd PCR检测N1、E基因的线性范围为25-1600 copies/reaction,N1、E基因LOQ分别为6.45、5.25 copies/reaction。N1、E基因的LOD分别为1.58、1.58 copies/reaction。负离子膜吸附洗脱的回收率在10.8%-15.7%。结论:废水中SARS-CoV-2的检测可以作为一种快速、经济和有效的工具,可用于监测废水中SARS-CoV-2的浓度,从而就当前和即将到来的流行病提出预警。
其他文献
目的:旨在通过对“5+3”医学人才培养模式下临床医学生人文胜任力现状调查及影响因素的分析,系统地了解当前临床医学生医学人文胜任力的整体水平和医学教育过程中存在的问题,探寻影响医学生人文胜任力的关键因素,进而提出相应的对策和建议,以期对开展以岗位胜任力为导向的医学人文教育改革提供参考。方法:1.文献分析法。对“5+3”培养模式下临床医学生人文胜任力的相关文献、书籍、政策文件等充分研读,对临床医学生医
通过对长吻（Ｌｅｉｏｃａｓｉｓｌｏｎｇｉｒｏｓｔｒｉｓ）、南方大口鲶（Ｓｉｌｕｒｕｓｍｅｒｉｄｉｏｎａｌｉｓ）胃、肠道所作大体解剖观察对比、粘膜扫描电镜观察、蛋白酶和淀粉酶活力测定等的研究结果表明，南方大口鲶的胃壁和胃粘膜皱褶非常发达，其伸缩能力远强于长吻。但长吻的胃、肠粘膜的分泌功能较南方大口鲶强，其蛋白酶和淀粉酶活力强于相近体重的南方大口鲶。南方大口鲶的发达的胃壁作用可能在于有较强的伸张
背景:由于心血管疾病的全球性流行趋势,越来越多人关注低碳水化合物饮食（LCD）在心血管疾病方面的作用。但LCD的同时必然伴有高脂肪高蛋白的摄入,这会增加低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平,从而增加心血管疾病死亡的风险。因此LCD预防心血管疾病的作用尚存在争议,目前关于LCD评分与心血管疾病危险因素之间关系的流行病学研究结果有限且存在不一致的结果。目的:本研究旨在探讨三种类型LCD评分与河北省成人
目的:营养干预对PM2.5暴露引起的健康损害有保护作用,但相关的机制需进一步研究。代谢组学是新兴工具,可以识别与疾病更密切相关的低分子代谢物。本研究利用非靶向代谢组学技术,通过人群试验,探究维生素C对暴露于大气颗粒物人群的保护作用机制。方法:本研究采取随机双盲对照实验。从河北医科大学在校大学生中招募57名研究对象,随机将研究对象分为两组,分别给与维生素C和安慰剂,对所有研究对象进行体格测量和采集血
目的:应用液相色谱-质谱联用技术（Liquid Chromatography-Mass Spectrometer,LC-MS）对大气细颗粒物（Fine Particulate Matter,PM2.5）暴露人群的血清以及虾青素干预的PM2.5暴露人群的血清进行检测,找出差异代谢物,从而探究虾青素对PM2.5暴露人群的保护作用,为膳食补充虾青素保护易感人群免受PM2.5损害提供科学依据。方法:采用随
目的:近年来,HIV-1新型重组毒株在国内外均呈上升趋势,新型重组毒株的出现影响着HIV-1耐药的发生、疾病进展和免疫逃逸,再次提升了艾滋病防控的难度和疫苗研发的困难。本研究以2020年1月至2021年6月河北省全部新诊断且未经抗病毒治疗的HIV-1感染者为研究对象,采用横断面研究模式,通过分子流行病学分析,来掌握河北省HIV-1新型重组毒株流行情况,阐明河北省HIV-1 URFs近似全长基因特点
盐酸托莫西汀（Atomoxetine Hydrochloride）是非中枢兴奋剂,用于治疗儿童注意缺陷多动症。截至目前,国内外上市的盐酸托莫西汀制剂有胶囊剂和溶液剂等。由于口腔速溶膜具有崩解时间短,溶出速度快,药物吸收快,便于携带和运输,患者依从性好等优点,本课题旨在设计一种盐酸托莫西汀口腔速溶膜,筛选合适的处方和膜剂制备工艺,进行质量研究和稳定性考察,进行体内药物动力学研究考察膜剂的生物等效性。
目的:IncHI3型质粒可介导细菌间耐药基因的水平传播,促进细菌对多种环境条件的适应。本研究深入分析IncHI3型质粒及其衍生质粒的基因组学与生物信息学特征,旨在探究这些质粒骨架区和外源插入区的保守性与多态性,阐明耐药基因的遗传环境,为感染性疾病的预防和诊疗提供一定的理论指导。方法:选定实验室前期所收集的309株临床分离菌（均属于肠杆菌科细菌）,通过筛查基因（包含16S r DNA、菌种特异性基因
阿尔茨海默症（Alzheimer’s Disease,AD）是以进行性认知障碍为主要特征的神经退行性疾病。随着我国人口老龄化的发展,有超1000万人罹患AD,给家庭和社会带来了沉重的负担。β-淀粉样肽（β-amyloid Peptide,Aβ）是AD早期诊断和干预治疗的主要靶点之一。本文利用多功能纳米材料的独特优势,构建以Aβ为靶点的新型纳米诊疗体系,应用于AD的早期诊断、治疗与药物筛选领域,为A