论文部分内容阅读
目的探讨转化生长因子-β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)诱导后的自体骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal stem cells,BMSCs)复合自体“双相”骨基质明胶(Bone matrix gelatin,BMG)原位移植到手术切除的兔椎间盘部位,观察其修复椎间盘的可行性和效能。方法1.实验日本大白兔48只随机分为对照组(n=24)和实验组(n=24),采用体外细胞培养技术,抽取实验组动物髂骨骨髓,加入培养液混匀离心吸去上层脂肪及上清液后接种于培养瓶中行原代培养,通过换液逐渐去除不贴壁细胞,获得较纯的贴壁生长的BMSCs2.BMSCs经体外纯化传代扩增培养,对其进行形态学观察,绘制生长曲线和行CD34、CD44免疫组化鉴定3.将BMSCs培养至第三代,加入TGF-β1和维生素C(VitaminC)诱导分化,以获得组织工程种子细胞即软骨前体细胞,行免疫组化对其鉴定并观察诱导效果4.取实验组骨髓同时取下髂骨,取对照组兔子髂骨,按照Urist的方法略作改进对髂骨进行脱脂、脱钙、去蛋白等处理后得到“双相”BMG,按需修剪成一定大小和形状,灭菌后低温保存5.取实验组自体经诱导后的BMSCs接种于自体BMG上,构建细胞-载体复合物,体外培养三天后扫描电镜观察6.制作兔椎间盘完全切除模型,实验组植入自体细胞-载体复合物,对照组单纯植入自体BMG,分别于第8周、12周取材大体观察、HE染色、用硫酸-咔唑法、RT-PCR检测蛋白多糖,免疫组化、RT-PCR检测Ⅱ型胶原。所得数据经SPSS 11.5统计学软件进行统计学处理。结果1采用改良的贴壁筛选法能够获取BMSCs,纯度较好并且经免疫组化鉴定CD44阳性,CD34阴性;2在TGF-β1和VitaminC的诱导下BMSCs向软骨细胞方向转化,获得大量软骨前体细胞,免疫组化染色阳性;3 BMG及细胞-载体复合物电镜观察可见BMG表面粗糙,多孔隙,孔隙大小为100um～800um,细胞在BMG表面及孔隙内壁生长良好;4实验组软骨终板及纤维软骨组织生长修复椎间盘,对照组软骨终板及纤维软骨组织修复不明显,8周和12周实验组软骨终板及纤维软骨aggrecan和Collagen II的含量较对照组均明显增加(P<0.05),差异有统计学意义。结论BMSCs可以向椎间盘细胞分化增殖并修复椎间盘的软骨终板和纤维软骨组织。