地西泮是一种苯二氮卓类化学药品,在临床上适用于缓解焦虑惊厥、抑制中枢神经系统活动、镇静和催眠。出于利益驱使,部分不法商家会将地西泮非法添加在睡眠类功能性食物中,在长期食用后,由于地西泮代谢慢而导致在体内大量蓄积,对消费者的身体健康造成了潜在的危害,因此,研究地西泮快速准确检测方法具有重要的基础理论和实践意义。本论文围绕地西泮的检测方法展开深入研究,具体如下:（1）传统型免疫侧向层析试纸保健食品中非法添加地西泮检测方法的建立本方法基于毛细作用层析和抗原抗体特异性结合,地西泮抗体通过静电吸附作用与金纳米粒子表面结合,T线固定地西泮抗原,C线固定羊抗鼠二抗,通过肉眼观察C线和T线的出线效果来定性检测地西泮是否存在,并使用Image J软件通过扫描灰度实现对地西泮的定量分析。本实验优化了金纳米粒子偶联的抗体量、偶联时碳酸钾的添加量、封闭剂和重悬液的种类等关键实验参数。在最优实验参数下,检测结果可以在10 min内得到,定性判定的检测限为10 ppb,地西泮在浓度为0.1-10 ppb的范围内线性良好。（2）增敏型免疫侧向层析试纸保健食品中非法添加地西泮检测方法的建立本方法在传统型免疫侧向层析试纸的基础上增加一个增敏金标垫,增敏垫上为BSA抗体与金纳米粒子的偶联复合物,利用BSA抗体对地西泮金标垫上BSA的识别,提高试纸条的灵敏度。本实验优化了金纳米粒子偶联的BSA抗体量、增敏金标垫滴垫量、偶联封闭剂种类、与BSA抗体偶联的金纳米粒子粒径以确定最合适的实验参数。在最优实验参数下,对地西泮的检测可以在10min内完成,定性判定的检测限为1 ppb,比传统型试纸条的灵敏度高10倍,达到了增敏的效果,地西泮在浓度为0.01-1 ppb的范围内线性良好。（3）乳胶微球标记免疫侧向层析试纸保健食品中非法添加地西泮检测方法的建立本方法的原理是基于竞争法免疫侧向层析试纸,用乳胶微球取代胶体金标记地西泮单克隆抗体来快速检测地西泮。乳胶微球是由苯乙烯和二乙烯基苯聚合而成的一种材料,具有强疏水性、稳定性强、粒径分布均一、颗粒较大等优点,作为标记材料可以节省抗体和抗原用量,成本更加低廉。本实验用乳胶微球标记地西泮单克隆抗体,在T线固定地西泮抗原,C线固定羊抗鼠二抗,通过肉眼观察C线和T线的出线效果来定性检测地西泮是否存在,并使用Image J软件通过扫描灰度实现对地西泮的定量分析。本实验优化了偶联的地西泮抗体量、乳胶微球用量、T线地西泮抗原浓度、上样缓冲液种类、封闭剂种类等参数,确定最合适的实验参数。在最优实验参数下,对地西泮的检测可以在10 min内完成,定性判定的检测限为5 ppb,地西泮在浓度为0.1-5 ppb的范围内线性良好。乳胶微球标记的灵敏度结果较金纳米粒子标记的更高,为乳胶微球在免疫侧向层析试纸上的应用提供了发展空间。