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[目的]建立大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)、嗅鞘细胞(OECs)的体外分离、纯化和培养方法,及大鼠全横断脊髓损伤模型,探讨BMSCs、OECs单独移植及BMSCs+OECs联合移植对全横断损伤大鼠脊髓Ⅷ、Ⅸ板层神经元存活的影响、及胶质瘢痕中GFAP和APC的表达和神经纤维再生的变化,为细胞移植治疗脊髓损伤提供理论和实验室依据。[方法]体外分离培养大鼠BMSCs和OECs并进行细胞染色鉴定；清洁级健康SD雄性大鼠25只,每组5只将动物随机分为假手术组(SG组)、手术对照组(CG组)、BMSC单独移植组、OEC单独移植组和BMSCs+OECs组。体外条件下将骨髓源性间充质干细胞(Dil标记)和OECs (Hoechst33342标记)立体定向移植入慢性期(全横断术后14天)全横断损伤大鼠脊髓的瘢痕处、头侧和尾侧。在脊髓损伤后第6m末灌注固定后取瘢痕处及头尾侧脊髓制作石蜡切片,行苏木素染色及免疫组化染色,分别计数各组脊髓Ⅷ、Ⅸ板层神经元数量及面积；计数各组瘢痕中GFAP和APC阳性细胞数量并分析其免疫染色OD值,同时观察宿主PKCγ、5-HT及CGRP阳性纤维再生情况。SPSS11.5软件包对数据进行统计学处理。[结果]1,细胞培养结果：培养的细胞分别经CD44和p75免疫染色,结果呈阳性反应,鉴定为BMSCs和OECs;2,细胞移植对宿主神经元存活的影响：手术对照组Ⅷ、Ⅸ板层神经元数量和面积均少于假手术组(p<0.05)；①比较各实验组VIII板层神经元数量结果显示：BMSC组与手术对照组无显著差异(p>0.05), OEC组多于手术对照组(p<0.05), BMSC+OEC联合移植组多于BMSC组或OEC组(p<0.05)；②比较各组Ⅷ板层神经元面积结果显示：BMSC组与手术对照组无明显变化(p<0.05), OEC组大于手术对照组(p<0.05),BMSC+OEC联合组大于BMSC组、OEC组(p<0.05)；③比较各组Ⅸ板层神经元数量结果显示：BMSC组或OEC组与手术对照组无明显差异(p>0.05),BMSC+OEC联合组多与BMSC组(p<0.05),BMSC+OEC联合组与OEC组无明显差异(p>0.05)；④比较各组Ⅸ板层神经元面积结果显示：BMSC组与手术对照组无明显差异(p>0.05), OEC组大于手术对照组(p<0.05),BMSC+OEC联合组大于BMSC组或OEC组(p<0.05)。3,细胞移植对宿主瘢痕组织中星形胶质细胞和少突胶质细胞的影响：3.1,细胞移植对宿主瘢痕中星形胶质细胞形成影响：脊髓全横断损伤后,宿主瘢痕组织中GFAP阳性细胞数目或免疫染色OD值均明显多于假手术组(p<0.05)。①比较各细胞移植组GFAP阳性细胞数目结果显示：BMSC组或OEC组均少于手术对照组(p<0.05),在两组的瘢痕头段皮质脊髓束(corticol spinal tract, CST)部位与手术组比较无差异(p>0.05),两组的瘢痕头段灰质部位和尾段后角部位均少于手术组(p<0.05)；BMSC+OEC联合组少于BMSC组或OEC组(p<0.05),其中联合组头段CST部位多于BMSC组(p<0.05),与OEC组比较无明显差异(p>0.05),联合组头段灰质部位少于BMSC组或OEC组(p<0.05),联合组尾段后角部位少于BMSC或OEC组(p<0.05)。②比较各细胞移植组GFAP免疫染色OD值结果显示：BMSC组或OEC组均弱于手术对照组(p<0.05),其中BMSC组瘢痕头段CST部位和瘢痕尾段后角部位均弱于手术组(p<0.05),瘢痕头段灰质部位与CG组无明显差异(p>0.05), OEC组瘢痕头段CST部位与CG组无明显差异(p>0.05),瘢痕头段灰质部位和瘢痕尾段后角部位均弱于手术组(p<0.05),BMSC+OEC联合组弱于BMSC或OEC组(p<0.05),其中瘢痕头段灰质部位和瘢痕尾段后角部位均弱于BMSC或OEC组(p<0.05),瘢痕头段CST部位与BMSC组或OEC组比较均无显著差异(p>0.05)。3.2,细胞移植对宿主瘢痕中少突胶质细胞的影响：脊髓全横断损伤后,宿主瘢痕组织中APC阳性细胞数目或免疫染色OD值均明显少于假手术组(p<0.05)。①比较各细胞移植组APC阳性细胞数目结果显示：BMSC组或OEC组均多于手术组(p<0.05),其中BMSC组瘢痕头段CST部位多于手术组(p<0.05),OEC组瘢痕头段CST部位与手术组无明显差异(p>0.05)BMSC或OEC组的瘢痕头段灰质和瘢痕尾段后角部位均多于手术组(p<0.05), BMSC+OEC联合组多于BMSC组(p<0.05),其中瘢痕头段CST部位与BMSC组无明显差异(p>0.05),瘢痕头段灰质部位和瘢痕尾段后角部位均多于BMSC组(p<0.05)；BMSC+OEC联合组与OEC组无显著差异(p>0.05),但在瘢痕头段CST和灰质部位、瘢痕尾段后角部位均多于OEC组(p<0.05)。②比较各细胞移植组APC免疫染色OD值结果显示：BMSC组或OEC组均多于手术组(p<0.05),其中两组的瘢痕头段CST部位与手术组比较均无明显差异(p>0.05),两组的瘢痕头段灰质和瘢痕尾段后角部位均多于手术组(p<0.05), BMSC+OEC联合组强于BMSC组(p<0.05),其中瘢痕头段CST和灰质部位强于BMSC组(p<0.05),瘢痕尾段后角部位无明显差异(p>0.05), BMSC+OEC联合组强于OEC组,其中瘢痕头段CST和灰质部位、瘢痕尾段后角部位均强于OEC组(p<0.05)。4：细胞移植对各组脊髓神经再生的影响：①PKCγ阳性纤维的再生：全横断损伤后各组PKCγ阳性纤维均未发现有轴突再生,瘢痕组织中未发现有PKCγ阳性染色。②5-HT阳性纤维再生：各组脊髓5-HT阳性纤维均进入瘢痕组织,其中手术组进入长度532.60+145.74μm(距离瘢痕头段距离)；BMSC组进入长度1698.00±880.81μm; OEC组进入长度(?)659.80±271.54μm, BMSC+OEC联合移植组进入长度1492.00+337.52μm,比较发现BMSC组和BMSC+OEC联合移植组的5-HT阳性纤维再生长度大于手术组(p<0.05),联合移植组移植效果优于OEC组(p<0.05),与BMSC组相比无明显差异(p>0.05)。③CGRP阳性上行纤维的再生：手术组未进入瘢痕,距瘢痕尾段962.40±441.14μm; BMSC组也未进入瘢痕,距离尾段313.60±109.79μm; OEC组长入瘢痕,进入长度为198.00±85.26μm; BMSC与OEC联合移植组的CGRP上行纤维长入瘢痕,进入长度为531.80+162.62μm,各细胞移植组的CGRP上行纤维的再生长度均大于CG组(p<0.05), BMSC与OEC联合移植组CGRP阳性纤维再生长度大于BMSC或OEC单独移植组(p<0.05)。[结论]：1、全横断脊髓损伤导致宿主脊髓Ⅷ、Ⅸ板层神经元死亡,数量减少,残存神经元胞体萎缩,面积减小。2、BMSC单独移植组未能促进宿主脊髓Ⅷ、Ⅸ板层神经元的存活,也未能抑制宿主神经元的变性萎缩；OEC单独移植可提高宿主脊髓Ⅷ板层神经元的存活,不能促进IX板层神经元存活,OEC单独移植可抑制宿主脊髓Ⅷ、Ⅸ板层神经元的萎缩；BMSC+OEC联合移植组比BMSC组更能促进宿主VIII、IX板层神经元的存活,联合移植组比OEC组更能促进VIII板层神经元存活,在促进IX板层神经元存活方面与OEC无明显差异,在抑制宿主神经元萎缩方面联合移植组比BMSC或OEC单独移植效果更佳。3：全横断脊髓损伤后脊髓组织中胶质瘢痕形成,GFAP阳性反应增强,脊髓神经纤维轴突出现脱髓鞘病变,APC阳性反应减弱。BMSC或OEC细胞移植均可改善瘢痕微环境,抑制胶质瘢痕的形成并可促进少突胶质细胞的存活,BMSC与OEC联合移植作用效果更佳。4：脊髓全横断损伤后,PKCγ阳性纤维和CGRP阳性上行纤维不能再生进入瘢痕组织,5-HT阳性纤维可再生进入瘢痕组织一定长度；BMSC与OEC单独或联合移植不能促进PKCγ阳性纤维的再生；BMSC移植或BMSC+OEC联合移植均可促进5-HT阳性纤维再生,OEC移植不能促进5-HT阳性纤维再生；BMSC和OEC单独或联合细胞移植均可促进CGRP阳性上行纤维的神经再生,其中OEC移植或BMSC+OEC联合移植可促进CGRP上行阳性纤维进入瘢痕组织,联合细胞移植的促再生作用更佳。