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应用组织工程技术,体外诱导人骨髓间充质干细胞,建立纳米晶羟基磷灰石/胶原骨共培养的人工骨模型,探求细胞与纳米晶胶原骨结合的最佳模式。
方法:实验于2005~09/2006-09在江苏大学医学技术学院中心实验室完成。全骨髓法体外培养骨髓间充质干细胞并扩增,记录细胞生长曲线,应用成骨诱导剂诱导向成骨细胞表型转化,通过细胞活性、免疫组化鉴定诱导培养的成骨细胞的细胞学特性。骨髓间充质干细胞培养至第三代后分为两组:第一组骨髓间充质干细胞先与纳米晶胶原基骨复合培养3天后再加入成骨诱导剂,第二组骨髓间充质干细胞在诱导成骨细胞后与纳米晶胶原基骨复合培养。两组复合物经体外孵育两周后,通过扫描电镜比较细胞在其中生长情况。
结果:倒置显微镜下观察原代培养的骨髓细胞增殖迅速,基本都呈形态均一成纤维样细胞,10~12天左右即可长满,并可稳定传代,传代细胞7~9天即可传代。诱导培养后的细胞呈现典型的成骨细胞形态和生物学特征。构建出骨髓间充质干细胞与纳米晶胶原基骨组织共培养的模型。体外复合后扫描电镜观察,见细胞可在纳米晶胶原基骨内表面良好贴壁:第一组复合物可见细胞贴附,但成骨细胞少见;第二组复合物细胞数量明显较前者多。复合培养8天,分布于支架材料上的细胞大量增殖、分泌细胞外基质。第14天,大量细胞在材料表面和孔隙中生长。细胞之间广泛存在突起连接,局部有胶原分泌,且可见成骨细胞形成。
结论:证实纳米晶胶原骨适合种子细胞的贴附、生长和增殖,经成骨诱导后的细胞较骨髓间充质干细胞更易与材料贴附、增殖。