本文主要研究猪苓多糖对膀胱癌细胞的直接作用，包括对膀胱癌细胞体外增殖、细胞凋亡、细胞周期、癌细胞内Ca²⁺浓度以及p53、H-ras基因表达的影响。也研究了猪苓多糖对小鼠胸腺细胞凋亡过程的影响。 方法：本文以体外培养的人膀胱癌T24细胞株作为研究材料。①利用MTT比色法研究猪苓多糖对T24细胞的增殖抑制作用，绘制生长曲线，计算半数抑制浓度IC₅₀值（实验1）。②采用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡（实验2，实验3）。③采用流式细胞仪观察药物作用后T24细胞的细胞周期变化（实验2）。④利用荧光标记的Ca²⁺探针，激光共聚焦显微镜定量检测加药后一定时限内细胞内Ca²⁺浓度的动态变化（实验4）。⑤利用免疫荧光方法，激光共聚焦技术定量检测p53、H-ras基因表达的变化（实验5）。统计分析采用PEMS Version 2.1软件完成，实验1、实验2、实验3的数据用成组数据多样本两两比较的秩和检验，实验4、实验5的数据用两样本均数的比较t检验。 结果：①低浓度猪苓多糖（≤400μg／ml）时，对膀胱癌T24细胞的生长不产生明显影响，随着浓度的增高，猪苓多糖能抑制T24细胞的增殖，其IC₅₀值为7.60mg／ml，药物作用效能比为1.53。②猪苓多糖10μg／ml，100μg／ml，200μg／ml，1mg／ml，2mg／ml作用人膀胱癌T24细胞24，48小时后，琼脂糖凝胶电泳未见DNA ladder，仅见基因组DNA条带，流式细胞仪检测猪苓多糖各浓度凋亡率与对照组比较差异无显著性（P＞0.05）；作用T24细胞24小时，对T24细胞周期分布没有明显影响，作用48小时后，使G1期细胞减少，S期细胞堆积，G2期细胞减少。③猪苓多糖10μg／ml，100μg／ml，200μg／ml，1mg／ml，2mg／ml浓度作用小鼠胸腺细胞24小时后，琼脂糖凝胶电泳未见DNA ladder，仅见基因组DNA条带。流式细胞仪检测猪苓多糖各浓度凋亡率与对照组比较差异无显著性（P＞0.05）；对地塞米松诱导的胸腺细胞凋亡具有抑制作用，使胸腺细胞的凋亡率下降，随着浓度升高，下降越明显。④猪苓多糖低剂量（0.2μg／ml）使T24细胞内钙先降低，然后回到正常水平，高剂量（＞1μg／ml）使T24细胞内钙升高，最后维持在高钙水平上。猪苓多糖主要促进细胞核内Ca²⁺升高，细胞浆Ca²⁺无明显改变。⑤猪苓多糖显著增加p53蛋白表达，24小时表达达最高，呈弥漫性地分布，随后逐渐下降，对照组在24小时表达很弱，48小时表达最强；猪苓多糖对H-ras基因蛋白表达无明显影响。 结论：①猪苓多糖能抑制人膀胱癌T24细胞的增殖，并且对WI-38细胞 硕士学位论文：猪谷多糖抗膀棚癌的作用机制研究·摘要抑制作用较小。②猪菩多糖不能引起人膀眺癌T24细胞DNA的片段化，推断猪芬多糖不能诱导人膀眈癌T24细胞的凋亡。对T24细胞细胞周期分布有一定影响，能将T24细胞阻滞在S期。③猪苔多糖不能诱导胸腺细胞凋亡。对地塞米松诱导的小鼠胸腺细胞凋亡具有抑制作用，推测其抑制作用机制是干扰了地塞米松介导的细胞信号传导过程。④猪菩多糖可引起 T24细胞内 Ca‘”水平的显著变化，而且这种变化主要表现在细胞核内，提示猪菩多糖参与了人膀眈癌T24细胞信号传导过程并参与将信息传入核内。⑤猪菩多糖对T24细胞n53基因蛋白表达有一定的凋节作用。对H＊as基因蛋白表达无明显影响。