下调CD133表达对肝癌细胞HUH7、脑胶质瘤细胞U251及恶性黑色素瘤细胞D375体外生长的影响

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目的:探讨肿瘤干细胞(CSCs)表面标记物,5次跨膜蛋白CD133(又名Prominin-1)的功能及对三种肿瘤细胞系:Huh7,U251和A375体外生长特性的影响,并分析其同家族蛋白Prominin-2是否有类似或协同的功能。   方法:选取人肝癌细胞系Huh7、人脑胶质瘤细胞系U251及人恶性黑色素瘤细胞系A375为研究对象,采用CD133/Prominin-1 反义寡核苷酸(ASODN)及无关寡核苷酸(NSODN)分别转染以上三种细胞。RT-RCR检测CD133 mRNA 水平,流式细胞仪检测CD133表达和细胞周期分布,集落形成实验检测细胞集落形成能力,活细胞计数法计算细胞生长。同上法,加以Prominin-2 ASODN转染Huh7细胞,并检测细胞集落形成能力变化。   结果:在CD133/Prominin-1 ASODN转染的各细胞系中,ASODN组细胞与空白对照组及NSODN组相比,其CD133 mRNA 水平均明显降低(P<0.05)。其中在Huh7细胞中,ASODN组细胞表面CD133表达率明显降低(P<0.05),细胞集落形成率也相应明显降低(P<0.005),细胞周期中ASODN组S期比例显著增高(P<0.05),细胞G0-G1期比例较NSODN组细胞略低,但差异无显著性(P>0.05)。在U251细胞中,ASODN组与空白对照组及NSODN组相比,第14 天细胞数量明显较少(P<0.05)。而在A375细胞中,ASODN组细胞集落形成率与空白对照组及NSODN组相比并无明显差异。另外,在以Prominin-2 ASODN转染的Huh7细胞中,ASODN组细胞集落形成率较对照组无显著性差异(P>0.05)。   结论:ASODN转染下调CD133/Prominin-1表达可使Huh7细胞的集落形成能力显著下降,且可对Huh7细胞周期的分布产生一定影响;可显著抑制人脑胶质瘤细胞U251的体外增殖;但对人恶性黑色素瘤细胞A375的集落形成能力无明显影响。而Prominin-2 ASODN转染对Huh7细胞集落形成能力无显著影响。CD133有可能作为肿瘤治疗的新的靶点。
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