不同分子量海带岩藻聚糖硫酸酯消化吸收、免疫及抗病毒活性的比较研究

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岩藻聚糖硫酸酯是褐藻中特有的一种以岩藻糖为主构成的水溶性硫酸多糖,具有较好的生物活性。但是不同分子量海带岩藻聚糖硫酸酯的化学组成、结构和生物活性差异较大,且高分子量的海带岩藻聚糖硫酸酯的消化吸收受到质疑。因此,明确分子量大小对海带岩藻聚糖硫酸酯消化吸收和生物活性的影响对海带岩藻聚糖硫酸酯功能性产品的开发及海带的高值化利用具有重要意义。以此为背景,本文以海带岩藻聚糖硫酸酯粗多糖为原料,对不同分子量海带岩藻聚糖硫酸酯的化学组成及活性进行了系统研究。本文研究的内容包括以下几部分:1.采用不同制备方法得到的不同分子量海带岩藻聚糖硫酸酯(海带-Fucoidan)的化学组成研究:通过Q-Sephrose FF阴离子色谱柱分级纯化和自由基氧化降解法制备出了中、低不同分子质量组分的岩藻聚糖硫酸酯,同时测定其分子量、硫酸根含量和单糖组成等化学指标。确定了中分子量岩藻聚糖硫酸酯的适宜分级洗脱浓度,分别为1mol/LNaCl和2.5mol/LNaCl,以这两种浓度分别得到F-1(26kDa)和F-2(34kDa)组分,硫酸根含量分别为13.44%和29.57%;通过比较粗糖质量和H2O2浓度对产物的分子量和化学组成的影响,确定了制备高硫酸根高岩藻糖的低分子量岩藻聚糖硫酸酯的最佳条件是:4.5%H2O2与0.0267mol/L Cu2+降解4.5g岩藻聚糖硫酸酯,得到Fa3(Mw7.68kDa)和Fb3(Mw3.89kDa)两个组分,其硫酸根含量较高,分别为30.32%和32.48%。Fa3组分主要由岩藻糖(64.25%)和半乳糖(30.74%)组成,而Fb3的硫酸根和半乳糖含量高于Fa3,但岩藻糖含量下降。2.血清单糖含量测定方法的建立:验证了PMP-HPLC法可准确的测定血清单糖组成。该方法灵敏、准确,且重现性好,所受干扰因素少,可以满足对大鼠血清岩藻糖含量进行定性和定量检测。同时还可以定量检测血清样品中含有的:甘露糖、氨基半乳糖、氨基葡萄糖、葡萄糖以及半乳糖其他的这5种单糖。采用PMP-HPLC法测得血清岩藻糖加标回收率在102.7%~105.3%之间,RSD为1.31%。3.不同分子量海带-Fucoidan的消化吸收特性:采用PMP-HPLC法,研究了在大鼠体内不同分子量海带-Fucoidan的消化吸收特性,实验结果表明中分子质量和中电荷密度的海带-Fucoidan以及低分子量的海带-Fucoidan口服后均能被大鼠吸收,但是中分子量的吸收速度较缓慢,血清岩藻糖的变化趋势不明显;而经自由基降解后的低分子量组分其吸收速度大大升高。可以得出结论:分子量大小可以影响多糖的吸收效果,且吸收效率大致与分子量成反比,分子量越低,其吸收效率越高。4.不同分子量海带-Fucoidan的免疫调节作用:采用给小鼠灌胃不同分子量的海带-Fucoidan组分,得出中、低分子质量的海带岩藻聚糖硫酸酯组分均能显著提高免疫低下小鼠的脾脏/体质量比值,提高血清溶血素含量和提高腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力,以及增强迟发型变态反应能力。海带岩藻聚糖硫酸酯对免疫低下小鼠具有较好的免疫调节作用,且中、低分子质量的岩藻聚糖硫酸酯对免疫低下小鼠的免疫调节作用没有显著性差异。5.不同分子量海带-Fucoidan体外抑制流感病毒神经氨酸酶的作用:通过体外实验,得出不同分子量海带-Fucoidan组分均具有较好的抑制流感病毒神经氨酸酶活性的作用,但中分子量组分的抑制活性明显高于低分子量组分。综上,比较研究不同分子量海带岩藻聚糖硫酸酯的消化吸收特性、免疫以及抗流感病毒活性,不仅为深入研究分子量、结构与活性的构效关系奠定基础,同时也为低分子量海带岩藻聚糖硫酸酯功能性产品的开发和高值化利用提供了理论依据。
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