第一部分、人血清β2-GP I/Lp(a)、P2-GP I/LDL复合物水平ELISA方法的建立和临床应用研究　　 心脑血管疾病已成为全世界第一致死病因，动脉粥样硬化(As)是该类疾病的主要病理基础，脂代谢异常是最重要的致病因素之一。低密度脂蛋白(lowdensity lipoprotein，LDL)和脂蛋白(a)[lipoprotein(a)，Lp(a)]是人血循环中存在的两种主要的致As脂蛋白。β2-GP I(β2-glycoprotein I，β2-GP I，又称为载脂蛋白H)是一种血浆糖蛋白，易与凝血酶原、磷脂、肝素等带负电荷的物质结合，并且与LDL、Lp(a)有一定结合力。最近国外发现，一些常伴发心血管疾病的自身免疫性疾病患者体内能形成稳定、不易解离的β2一GP I/Ox-LDL复合物，如IgA肾病等。其原因是由于IgA肾病病人体内氧化压力增加，致使LDL发生氧化修饰后负电荷增加，与β2-GP I的结合力大大增加所致。Lp(a)与LDL在结构与体外氧化形为上均相似，在氧化压力增加状态下，也易于发生氧化修饰并导致分子的负电荷增加。为此我们推测Lp(a)氧化后[Ox-Lp(a)]可能与β2-GP I的结合能力也会增加，致使β2-GP I与Lp(a)的整体结合水平上升，即β2-GP I/Lp(a)复合物的水平上升。通过建立ELISA方法我们检测了IgA肾病患者血清β2-GP I/Lp(a)水平，同时与正常人作对照。并进行了初步的临床诊断价值评估。此外也建立了检测β2-GP I与LDL(β2-GP I/LDL复合物)整体结合水平的ELISA方法。　　 目的：建立人血清β2-GP I/Lp(a)ELISA测定方法，证实人循环中存在β2-GP I/Lp(a)复合物，并进行初步的临床应用研究，以探讨其潜在的临床诊断价值。同时建立人血清β2-GP I/LDL复合物ELISA方法和相关临床研究。　　 方法：①自制肝素琼脂糖6B亲和柱(heparin-sepharose6B)分离纯化人血清β2-GP I；②免疫新西兰白兔获得多克隆抗体并进行鉴定；③分别建立人血清β2-GP I/Lp(a)复合物和β2一GP I/LDL复合物ELISA检测方法并评价方法的可行性；④建立两种复合物正常参考范围；⑤检测50例IgA肾病患者血清两种复合物的水平，与正常对照组(n=50)比较，进行临床价值评估。同时检测IgA。肾病患者血清Lp(a)水平，评价β2-GP I/Lp(a)复合物水平与血清Lp(a)浓度的相关性。　　 结果：①自制heparin-sepharose6B肝素结合量约为4 mg/g；经SDS-PAGE、Western-blotting和氨基酸组成分析显示获得了高纯的β2-GP I抗原；②制备的抗体和抗原反应的特异性与购置的国外抗体产品相似；③检测β2-GP I/Lp(a)复合物的ELISA方法批内与批间CV分别为6.61％(n=24)与13.02％(n=7)；β2-GP I/LDL分别为5.73％与10.67％；④以均值+2个标准差(x+2s)作为临界值(cutoff)，单位定为1 U/ml时，按95％的可信区间计算，β2-GP I/Lp(a)和β2-GP I/LDL复合物的正常参考范围分别为0.424±0.58 U/ml与0.66±0.34 U/ml。⑤IgA肾病患者血清β2-GP I mp(a)和β2-GP I/LDL复合物水平分别为1.45±0.57U/ml和1.27±0.23 U/ml，明显高于健康对照组(0.41±0.29U/ml和0.66±0.17 U/ml)(P<0.0001)。β2-GP I/Lp(a)检测IgA肾病患者的灵敏度和特异性分别为80％和96％，β2-GP I/LDL分别为86％和100％。⑥IgA肾病患者血清β2-GP I/Lp(a)复合水平与血清Lp(a)浓度未呈现统计学相关(r=0.26，P=0.069)。　　 结论：①自制的heparin-sepharose6B纯化β2-GP I效果好，大大节省了成本开支；②建立的ELISA方法重复性好，可行；③IgA肾病时不仅β2-GP I/LDL复合物水平升高，而且β2-GP I/Lp(a)复合物水平也显著增加。并且β2-GP I/Lp(a)复合物水平的上升可能主要是由于Lp(a)氧化后与β2-GP I结合力上升。④β2-GP I/Lp(a)与β2-GP I/LDL复合物相似，对IgA肾病具有较高的检出灵敏度与特异性，提示其有潜在的临床诊断价值。　　 第二部分、肾病综合征儿童血清CETP水平检测和影响因素分析胆固醇酯转运蛋白(cholesteryl ester transfer protein，CETP)是存在于血浆中的一种疏水性糖蛋白，它介导血浆脂蛋白间非极性脂质的交换和平衡，同时，CETP在HDL代谢和胆固醇酯(CE)逆向转运中也起着重要作用。国外有文献报道，成人肾病综合征(nephrotic syndrome，NS)患者CETP浓度或活性升高，但由于研究的病例较少，有关CETP水平升高的原因以及对高脂血症形成的作用未有确切的结论。儿童原发性NS在我国有较高的发病率，并呈逐年增加趋势。为此我们对NS患儿血清CETP水平及相关指标进行了检测，分析变化机制并评价临床应用价值。　　 目的：检测原发性NS患儿CETP水平、变化机制及与高脂血症的关系，探讨其临床诊断价值。　　 方法：NS患儿110例(男74例，女36例)，平均年龄6.7±3.1岁。其中69例处于活动期，41例为恢复期。以年龄、性别匹配的150名健康儿童作对照。采用ELISA法测定血清CETP浓度，同时测定肾功和血脂水平。　　 结果：活动期组有严重的低白蛋白血症和高脂血症，而恢复期组无论白蛋白浓度还是各种血脂和脂蛋白水平都明显恢复。活动期患儿与对照组相比，CETP水平明显升高(7.36±2.43 mg/L vs3.38±1.83 mg/L，P<0.0001)，而恢复期患儿CETP水平则处于正常范围内(2.91±1.77 mg/L)。单元回归分析显示，NS患儿CETP浓度与白蛋白水平强负相关(r=-0.688，P<0.0001)，与各种血脂和脂蛋白水平均呈强正相关关系(P<0.0001)。进一步多元回归分析发现，在白蛋白、尿蛋白、血脂和强的松用量等独立变量中仅白蛋白与CETP浓度相关显著。　　 结论：原发性NS患儿血清CETP水平明显升高，且升高程度与疾病程度相关；CETP水平增高可能不是高脂血症引起，但可能加重脂质紊乱；低蛋白血症是CETP升高的主要决定因素；CETP浓度检测有助于病情监控以及预后判断。