基于生物膜形成的乳酸菌连续接种工艺研究

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长期以来人们一直认为细菌是以单个的浮游状态生存的。直到近十年来,由于激光扫描共聚焦显微镜的诞生,人们发现,大多数细菌的生存方式是以生物膜为主、浮游状态为辅的。生物膜可由纯菌种形成,也可由多菌种组成。以生物膜形式存在的细菌不同于浮游细菌,它们对抗生素等杀菌剂、恶劣环境及宿主免疫防御机制有很强的抗性。生物膜内的细菌在生理、代谢、对底物的降解或利用和对环境的抵抗能力等方面都具有独特性质,因此对生物膜的研究日益受到重视。目前,关于生物膜的研究还主要集中在医学领域,对于一些致病菌的生物膜研究的相对比较多,对于乳酸茵等益生菌生物膜的研究还相对较少。由于操作简便且稳定性好,在过去几十年中,各种各样的生物膜已经在工业应用中取得了巨大的成功。另外,形成生物膜的细胞可再生,活力高,能够自我固定且成本较低,所以生物膜在工业生产中能够实现连续的操作。乳酸菌作为人体重要的益生菌类群,在发酵乳品工业中得到广泛的应用。本研究以嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)和保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)为研究对象,在适宜的载体上形成其混菌生物膜,并对该生物膜的抗性以及其在连续接种工艺中的研究进行了初步的探索,具体研究内容与结果如下:1.乳酸茵生物膜载体的筛选本部分以嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌在不同载体表面上形成的单菌生物膜为研究对象,通过一定的比较,筛选出不锈钢网和椰果粒可以作为适宜乳酸菌生物膜形成的载体材料。以嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌在这两种载体材料上形成的乳酸茵混菌生物膜为研究对象,对其进行了计数和观察,结果显示,所培养形成的乳酸茵混菌生物膜的菌量连续七天保持稳定,并且具有典型的生物膜结构,同时也说明了本研究中乳酸菌生物膜培养方法的可行性。2.乳酸茵生物膜抗性的初步研究本部分以嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌在不锈钢网和椰果粒载体上形成的混菌生物膜为研究对象,对其抗性进行研究,初步证明了,在这两种载体上形成的生物膜,在50℃、60℃和pH2.0的环境下,都显示出比浮游状态更强的抵抗能力,从一定角度证明了本研究中的乳酸菌生物膜具有对于不良环境的耐受能力,同时也进一步说明了按照本研究的培养方法形成的乳酸菌混菌生物膜为典型的生物膜。3.乳酸茵生物膜连续接种工艺的初步研究本部分以嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌在不锈钢网上形成的混菌生物膜为研究对象,通过对其发酵实验和其在连续接种工艺中的研究,发现利用生物膜上释放的乳酸菌代替正常接种是可行的;另外研究还表明,实验中的乳酸菌混菌生物膜可以连续稳定的提供至少106/ml接种量,而且若加以一定简单条件的恢复(例如,“养膜”过程),这一过程至少可以持续十五个循环以上,并且保持着很好的稳定性。
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