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胰高血糖素类肽-1(GLP-1,Glucagon-like peptide-1)是一种肠降血糖素(incretin),具有刺激胰岛素分泌、保护胰岛β细胞、抑制胰高血糖素分泌、抑制胃排空、降低食欲和食物摄入量的作用。研究表明,如果增加糖尿病患者体内GLP-1的含量,可以有效降低血糖,改善病情。GLP-1在体内会很快被二肽酶四(DPPIV,Dipeptidyl peptidase IV)水解而失活。通过抑制DPPIV的活性可以有效提高GLP-1的含量,从而达到治疗糖尿病的作用。本论文的研究目的是采用杆状病毒表达系统表达重组DPPIV,建立DPPIV抑制剂的高通量筛选模型,通过对国家新药筛选中心化合物库的筛选,以期寻找到新型的高效DPPIV抑制剂,用于进一步的新药研究和开发。本文首先对现有的pFastBac1质粒进行改造,将编码DPPIV胞外区(29-766氨基酸)cDNA构建到改造后的pFastBac1中,然后将其转化大肠杆菌DH10Bac后经蓝白斑筛选得到正确重组的杆粒。重组杆粒转染Sf9细胞,得含有目的基因的杆状病毒。病毒经过扩增之后,感染Hi5细胞,DPPIV表达在细胞外的培养基中。培养基经处理之后,通过镍柱纯化得到纯度在90%以上并且有活性的DPPIV。考察DPPIV的pH依赖性、酶动力学分析、抑制作用分析以及酶的热稳定性等一系列酶学性质后,发现DPPIV的酶学特性与文献报道一致。优化了其活性检测方法,通过使用Biomek 2000、Hydra 96加样系统以及荧光检测仪器Victor-2等仪器设备,建立DPPIV抑制剂高通量筛选的标准化操作流程。对国家新药筛选中心化合物库中三万多个化合物样品进行了筛选,有7个样品对DPPIV有较好的抑制作用,约占筛选总量的0.009%。筛选到的最好的化合物的IC50为微摩尔级别。研究此化合物的构效关系以及在动物水平能否降低血糖的实验尚在开展当中。这些新型结构DPPIV抑制剂的发现,为进一步的新药研究和开发打下了基础。