目的:研究胰岛素对糖尿病大鼠皮肤创面血管周细胞功能的调控,并探索介导胰岛素作用的信号转导机制。方法:采用高脂饮食喂养加小剂量链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)注射的方法制作具胰岛素抵抗特性的Ⅱ型糖尿病大鼠模型。在大鼠背部制造四个全层皮肤缺损创面,分为对照和试验组,每两个对角创面为一组,对照和试验创面随机选择。实验组局部滴加中性胰岛素(0.1u/20uL生理盐水),对照组滴加等体积生理盐水。分别取正常与糖尿病大鼠皮肤组织以及伤后第3、7和11天创面组织进行组织学观察(免疫组化、免疫荧光及电镜),比较两组皮肤创面血管形态,周细胞数量和凋亡情况。免疫蛋白印迹法检测两组皮肤组织中凋亡蛋白cleaved Caspse 3和磷酸化Akt(p-Akt)水平。建立人脑血管周细胞体外高糖培养模型,设立正常糖浓度对照组(control组)、高糖组(HG组)、高糖加胰岛素组(HG+ins组)及高糖加胰岛素加抑制剂组(HG+ins+LY294002组),采用CCK8以及免疫蛋白印迹法比较各组间周细胞增殖、凋亡及p-Akt水平差异。采用血管内皮细胞单独培养及血管内皮细胞与周细胞共培养系统,比较不同培养条件下的周细胞对血管内皮细胞成管的影响。结果:1.糖尿病大鼠皮肤血管周细胞包绕减少,凋亡增加,血管成熟和分化不良;与生理盐水组相比,胰岛素组皮肤创面血管周细胞数量增多,凋亡减少,p-Akt表达增强,血管更为成熟。2.高糖培养的周细胞,活性较正常组降低、凋亡细胞比例增多、凋亡蛋白Bax水平上调。胰岛素可逆转高糖对周细胞的上述作用。胰岛素对周细胞的保护作用可被PI3K抑制剂抑制。3.和单纯血管内皮细胞相比,与周细胞共培养的血管内皮细胞形成管腔样结构增多;与正常培养的周细胞相比,高糖培养的周细胞促进血管内皮细胞成管作用减弱;高糖培养的周细胞在胰岛素存在条件下,可使血管内皮细胞成管增加;以PI3K抑制剂预处理周细胞,在胰岛素处理后血管内皮细胞形成管腔样结构减少,胰岛素的作用被抑制。结论:1.糖尿病诱导周细胞凋亡;创面局部应用胰岛素可改善糖尿病大鼠皮肤创面血管周细胞减少或缺失,促进血管成熟。2.胰岛素抑制高糖诱导的周细胞凋亡,PI3K-Akt信号通路可介导胰岛素的上述作用。3.周细胞对血管内皮细胞成管有促进作用,高糖诱导周细胞损伤、影响血管内皮细胞成管;胰岛素通过激活PI3K-Akt信号通路改善周细胞功能、促进血管内皮细胞成管。