背景:舌诊是传统中医独特的诊断方法,通过辨析观察舌苔的颜色、腐腻、厚薄等不同中医舌苔类型来判断人体生理功能及病理情况。据现阶段研究结果显示,舌苔的形成机制目前尚未明确,而舌苔微生物是影响舌苔形成的重要原因。传统微生物研究的分子生物学方法如荧光定量PCR、变性梯度凝胶电泳DGGE等不仅工作量大、耗时长,且检测出的微生物丰度有限。Illumina Miseq测序技术弥补了传统分子生物技术的缺陷,对舌苔微生物丰度和多样性进行了全面分析,满足对舌苔微生物的全面认识。肺癌是我国癌症发病率和死亡率最高的肿瘤之一。目的:本课题采用Illumina Miseq测序平台对肺癌患者不同中医舌苔类型的舌苔微生物进行分析,目的为探讨肺癌患者不同中医舌苔类型和其舌苔微生物结构之间的关系及规律,进一步揭示舌苔形成原理,促进中医舌诊的客观化和标准化。方法:收集2013年12月至2014年12月2皖南医学院附属弋矶山医院肿瘤防治中心收治肺癌患者(均经病理确诊为肺癌者)41例,体检中心招募健康正常人43例。所有入选对象均签订知情同意书并获皖南医学院伦理道德委员会同意。研究对象端坐舌象仪(DS01-B)前进行舌象采集和分析后,用拭子采集舌苔并保存在EP管中留用。提取14名肺癌患者和7名健康人的舌苔样本微生物的总DNA,16S r RNA基因V3-V4高变区经PCR扩增后产物进行Illumina测序,对舌苔微生物的组成,丰度和多样性进行全面的分析。结果:1.经舌象信息采集系统分析,41名肺癌患者中常见舌苔类型有薄白苔21例,白腻苔10例,黄腻苔8例,无苔2例;43例健康人中42人为薄白苔,1人为薄黄苔。肺癌患者舌苔厚度明显高于健康人(314.86±222.47 vs.80.00±75.84,p<0.01)。2.41例肺癌患者有8例厚苔和6例薄苔,43例健康人中7例,共21份样本进行后续舌苔微生物测序分析。对21份舌苔微生物样本进行Illumina测序共获得508,003个有效序列,总碱基数为224,746,932bp,平均444.26bp,其中99.99%的序列长度为401-500bp。3.稀释性曲线表明本次测序覆盖了舌苔微生物97%的菌种。多样性分析提示厚苔组舌苔微生物丰度和多样性较其他两组均低。4.门水平,厚苔组检测出12个菌门,薄苔组检测出14个菌门,对照组19个菌门,与多样性分析相符。三组中主要菌门为厚壁菌门Firmicutes、拟杆菌门Bacteriodetes、变形菌门Proteobateria、放线菌门Actinobacteria、梭杆菌Fusobacteria,占所有门类的95%以上。属水平检测厚苔组、薄苔组和健康对照组分别有132,129和123个菌属。三组中主要菌属有普氏菌Prevotella、链球菌Streptococcus、韦荣菌Veillonella、奈瑟菌Neisseria、乳酸球菌Lactococcus、流感嗜血杆菌Haemophilus、颗粒链菌Granulicatella and梭杆菌Fusobaterium。厚苔组优势菌有链球菌Streptococcus、乳酸球菌Lactococcus和放线菌Actinomyces。结论:1.舌苔微生物的组成可能与中医舌苔类型有关;2.肺癌患者舌苔微生物的多样性和差异性可能是引起患者舌苔增厚的原因之一;3.特异性的舌苔微生物检测可能成为肺癌早期诊断的特异性生物标志物。