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目的:探讨目前西安市中心医院根除幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）失败人群的临床分离菌株对常用抗生素的耐药情况及可能导致Hp发生耐药的因素,并进一步分析Hp对克拉霉素耐药相关的23S r RNA V区基因突变位点检测与药敏试验的一致性,以指导临床合理用药,提高Hp的根除率。方法:1、收集2020年10月～2022年12月在西安市中心医院行13C-UBT/14C-UBT呼气试验阳性,且行胃镜检查的既往根除过Hp的患者胃窦及胃体的黏膜标本。2、在微需氧条件下对收集到的胃黏膜标本进行分离培养,对于成功培养出的菌株,根据肉眼观察菌落形态,革兰氏染色后光镜下识别,快速尿素酶试验,过氧化氢酶试验及氧化酶试验对菌株进行鉴定。3、应用E-test法对鉴定为Hp的临床分离株行甲硝唑、克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林、呋喃唑酮及四环素的药敏试验,统计分析Hp对常用抗生素的耐药情况及不同年代西安地区Hp耐药情况的变化。4、分析性别、年龄、胃部疾病、吸烟、饮酒、BMI与Hp耐药的相关性。5、选取部分研究对象的临床分离菌株行聚合链式酶反应（PCR）扩增23S r RNA V区基因片段并测序,并进一步分析耐药基因检测与药敏试验结果的一致性。6、统计分析软件采用SPSS24.0,对计数资料以例数和比率统计,计量资料用均数±标准差（±s）表示,应用卡方检验、Fisher确切概率法分析年龄、性别、BMI、吸烟、饮酒、胃部疾病与Hp对抗生素耐药的相关性及不同年代Hp耐药情况的变化;应用Kappa一致性检验分析耐药基因检测与药敏试验的一致性,P＜0.05认为差别有统计学意义。结果:1.本研究所纳入的140例患者中共有100例患者Hp分离培养阳性同时完成随访,阳性率为71.43%（100/140）;男性48人（48.0%）,女性52人（52.0%）,男性平均年龄（50.62±13.31）岁,女性平均年龄（47.90±11.16）岁;吸烟的人数32人（32.0%）,饮酒的人数18（18.0%）人,BMI＜24.00Kg/m~2的人数54人（54.0%）,BMI≥24.00Kg/m~2的人数46人（46.0%）;慢性萎缩性胃炎的人数为70人（70%）,慢性非萎缩性胃炎的人数为17人（17%）,消化性溃疡的人数为13人（13.0%）。2.本次研究中除菌失败人群的Hp临床分离株对甲硝唑、克拉霉素、左氧氟沙星的耐药率高依次为85.0%（85/100）、62.0%（62/100）、38.0%（38/100）,对阿莫西林、呋喃唑酮、四环素的耐药率低依次为6.0%（6/100）、7.0%（7/100）、4.0%（4/100）。3.除菌失败人群的Hp耐药形势严峻,未发现对所有抗生素均敏感的菌株,100人的Hp分离菌株中,27人的分离菌株（27.0%）对1种抗生素耐药,其中甲硝唑的单药耐药率最高为20人（20%）;46人的分离菌株（46.0%）对2种抗生素耐药,其中对甲硝唑+克拉霉素双重耐药率最高为27人（27%）;25人（25.0%）的临床分离菌株对3种抗生素耐药,其中对甲硝唑+克拉霉素+左氧氟沙星三重耐药率最高为23人（23.0%）;有2人（2.0%）的临床分离菌株发生了四重耐药。4.Hp对6种抗生素的耐药率与在性别、胃部疾病、吸烟、饮酒、BMI的分组中差异无统计学意义,（P＞0.05）。年龄分组中,年龄在60岁及以上患者的临床分离菌株对左氧氟沙星的耐药率66.7%（12/18）高于年龄小于60岁患者的临床分离菌株的耐药率41.9%（26/82）,差异有统计学意义（P＜0.05）。而甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林、呋喃唑酮、四环素的耐药率在年龄分组中差异无统计学意义（P＞0.05）。5.Hp对甲硝唑、克拉霉素的耐药率在2014年,2020年-2022年两个年代存在统计学差异（P＜0.05）,甲硝唑、克拉霉素的耐药率均较前升高,而Hp对左氧氟沙星、阿莫西林和四环素的耐药率在两个不同的年代差异无统计学差异（P＜0.05）;Hp的多药耐药率在两个不同的年代也存在统计许差异,多药耐药率较前升高（P＜0.05）。6.以性别、年龄、吸烟、饮酒、BMI分组的患者Hp临床分离菌株中多药耐药率的差异无统计学意义（P＞0.05）;在胃部疾病的分组中慢性萎缩性胃炎患者的临床分离菌株的多药耐药率明显高于慢性非萎缩性胃炎组及消化性溃疡组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。7.本研究共测序分析50例患者的Hp临床分离株,对胃窦及胃体部分离的Hp进行克拉霉素耐药基因检测,其中发生突变的菌株均为23S r RNA V区A2143G点突变。50人中完成胃体部耐药基因测序47人,其中42人已完成胃体部位Hp分离培养及药敏试验,经Kappa一致性检验后,Kappa值为0.837,提示两种检验方法一致性极好;50人中完成胃窦部耐药基因检测测序47人,其中41人完成胃窦部Hp分离培养及药敏试验,经Kappa一致性检验后,Kappa值为0.651,提示两种检验方法一致性较好。结论:1.目前西安市中心医院感染Hp的除菌失败人群的临床分离菌株在常用抗生素中对甲硝唑耐药率最高,其次为克拉霉素、左氧氟沙星,对阿莫西林、四环素、呋喃唑酮的耐药率仍较低,对甲硝唑、克拉霉素的耐药率及多药耐药率较往年升高。因此在Hp感染的补救治疗中不建议使用含有甲硝唑、克拉霉素及左氧氟沙星的除菌方案。2.年龄大于60岁的除菌失败人群,容易发生Hp对左氧氟沙星的耐药;患有慢性萎缩性胃炎的除菌失败人群,容易发生Hp的多药耐药。3.本研究中除菌失败人群的Hp对克拉霉素的耐药主要以耐药基因23Sr RNA的A2143G位点突变为主,Hp的克拉霉素的耐药基因检测与药敏试验具有良好的一致性,可以应用于临床。