目的：研究人乳头瘤病毒16型（HPV16）E2蛋白与Daxx的相互作用，为进一步探讨两种蛋白质相互作用在HPV16致癌中的作用及其机制提供实验参考依据。方法：(1)用PRIMER5.0软件分别设计HPV16E2及其结构域基因片段(氨基酸1-201、202-365和249-365)特异性引物，并引入EcoRI、BamHI酶切位点，PCR扩增目的基因。分别用EcoRI和BamHI双酶切PCR产物和质粒pGADT7，纯化回收酶切产物，T4连接酶连接后，转化E.coli JM109，筛选阳性克隆。经酶切鉴定及DNA序列分析，构建酵母菌表达载体pGADT7/HPV16E2、pGADT7/HPV16E2TAD、pGADT7/HPV16E2H-DBD和pGADT7/HPV16E2DBD。(2)应用LiAc法，分别将诱饵质粒pGBKT7/Daxx与猎物质粒pGADT7和pGADT7/HPV16E2转化酵母菌AH109，涂布于SD/-Trp、SD/-Leu、SD/-His、SD/-Ade(单缺)固体培养基上，30℃培养2-4d，检测诱饵质粒和猎物质粒对酵母菌AH109的自激活作用。(3)将质粒分为7组，它们分别是A组(pGADT7+pGBKT7)、B组(pGADT7-T+pGBKT7-Lam)、C组(pGADT7-T+pGBKT7-p53)、 D组(pGBKT7/Daxx+pGADT7/HPV16E2)、E组(pGBKT7/Daxx+pGADT7/HPV16E2TAD)、F组(pGBKT7/Daxx+pGADT7/HPV16E2H-DBD)和G组(pGBKT7/Daxx+pGADT7/HPV16E2DBD)。将每组质粒共转化酵母菌AH109，转化菌分别接种于SD/-Trp-Leu固体培养基，30℃培养2~4d，待平板上长出菌落后，接种单个菌落于SD/-Trp-Leu-His和SD/-Trp-Leu-His-Ade平板上，30℃培养2~4d，观察酵母菌的生长情况，分析Daxx与HPV16E2相互作用及其氨基酸结构域。(4)将pcDNA3.1/Daxx用BamHI酶切，收获约2.2kb片段，连入载体pet28a相同位点，筛选阳性克隆，构建6His-Daxx融合蛋白原核细胞表达载体pet28a/Daxx。分别培养E.coli BL21（含pet28a/Daxx或pGEX6p-1/HPV16E2质粒），IPTG诱导表达目的产物6His-Daxx或GST-HPV16E2，Ni-NTA或GST纯化试验盒分别纯化目的蛋白，SDS-PAGE和Western blot分析和鉴定融合蛋白。(5)取6His-Daxx和GST-HPV16E2融合蛋白纯化产物各0.5μg混合，加入抗GST或抗His抗体及500μl裂解缓冲液，进行免疫共沉淀试验（COIP）和Western blot；培养Caski细胞48h，收集细胞裂解液，经蛋白质A/G琼脂糖处理后，收集上清液，进行COIP和Western blot；IP抗体为抗Daxx或抗HPV16E2抗体，Western blot抗体为抗HPV16E2或抗Daxx抗体。(6)培养Caski细胞，利用间接免疫荧光试验和图像软件观察并分析HPV16E2蛋白和Daxx在Caski细胞内分布与定位或共定位。结果：(1) DNA序列分析结果显示HPV16E2及其结构域基因片段均正确地连入pGADT7载体，即构建了酵母菌表达载体pGADT7/HPV16E2、pGADT7/HPV16E2TAD、pGADT7/HPV16E2H-DBD和pGADT7/HPV16E2DBD。(2)转化了诱饵质粒pGBKT7、pGBKT7/Daxx的酵母菌AH109，在SD/-Trp固体培养基上可见菌落生长，而在SD/-Leu、SD/-His、SD/-Ade未见菌落生长。转化了猎物质粒pGADT7、pGADT7/HPV16E2的酵母菌AH109，在SD/-Leu固体培养基上可见菌落生长，在SD/-Trp、SD/-His、SD/-Ade培养板上未见菌落生长，即诱饵质粒和猎物质粒均无自激活作用。(3)A～G组质粒转化的酵母菌在SD/-Trp-Leu平板上均可见菌落生长。在SD/-Trp-Leu-His和SD/-Trp-Leu-His-Ade平板上，只有C、D、E组转化菌生长，A、B、F、G组未见菌落生长。(4)酶切鉴定结果显示，Daxx正确地连入pet28a载体，即构建了Daxx原核表达载体pet28a/Daxx。在E.Coli BL21，IPTG诱导其表达了6His-Daxx融合蛋白。COIP和Westernblot结果显示，在约90kDa与70kDa有条带，即HPV16E2与Daxx在细胞外发生了结合反应。(5)利用Caski细胞裂解上清液，COIP和Western blot结果显示，在约80kDa与60kDa出现条带，即HPV16E2与Daxx在细胞内发生了结合反应。(6)在Caski细胞，表达红色信号的HPV16E2和表达绿色信号的Daxx主要分布于Caski细胞胞浆，少数分布于细胞核；当红色信号与绿色信号重叠时，出现黄色信号。结论：(1)载体pGADT7/HPV16E2、pGADT7/HPV16E2TAD、pGADT7/HPV16E2H-DBD和pGADT7/HPV16E2DBD能在酵母菌中表达相应的目的蛋白；pet28a/Daxx能在E.coliBL21中表达融合蛋白6His-Daxx。(2) HPV16E2蛋白能在细胞内外结合Daxx；HPV16E2通过N端结构域（TAD）与Daxx结合并发生相互作用。(3)HPV16E2蛋白与Daxx主要分布于Caski细胞胞浆，且共定位胞浆与胞核。