【摘 要】
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目的:猪附红细胞体病是由立克次氏体目中的附红细胞体引起猪的一种以急性黄疸性贫血和发热为特征的传染病。为有效的建立附红细胞体病在野猪方面的综合治疗方法,该研究通过对野
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目的:猪附红细胞体病是由立克次氏体目中的附红细胞体引起猪的一种以急性黄疸性贫血和发热为特征的传染病。为有效的建立附红细胞体病在野猪方面的综合治疗方法,该研究通过对野猪附红细胞体的分离、培养、分子生物学与血常规诊断、药敏试验与治疗效果分析,表明野猪感染附红细胞体与家猪有很高的同源性,并且筛选出了强力霉素药物对野猪附红细胞体感染有较好的治疗效果,为野猪附红细胞体的治疗提供理论与技术支持。方法:(1)采集疑似附红细胞体病的野猪血液,提取基因组DNA,按照GenBank发布的猪附红细胞体的16SrRNA的保守区域设计引物,经PCR扩增的DNA片段,将其克隆入pUC-18载体,通过酶切、特异性试验以及序列分析证所得DNA基因片段。(2)以PPLO、灭活牛血清按一定比例混合作为野猪附红细胞体病原的基础培养基,并添加霉形体、M-199培养基、RPMI-1640三种不同的培养基,接种野猪自然感染附红细胞体的红细胞,置于37℃、含5%CO2培养箱中培养,定时更换培养孔中的上清部分培养液,分别按预定对附红细胞体的染虫强度、虫体颗粒大小、运动特点进行观察,染虫数进行记录,分析不同培养基的优劣。根据添加不同比例血清的和连续传代培养,筛选出培养附红细胞体的最佳条件。(3)利用体外培养确定的条件,选择贝尼尔、盐酸土霉素、磺胺间甲氧嘧啶钠、红霉素、强力霉素、盐酸吖啶黄等几种药物进行药敏试验,经一定时间的培养观察后,综合评价其中效果最好的药物,并进行最优药效组的浓度梯度试验。结果:(1)通过PCR扩增,得到的目的基因片段与猪感染的附红细胞体的预期基因具有一致性,大小为960bp左右,所以野猪与家猪感染的附红细胞体在16SrRNA基因有很高的同源性。诊断野猪附红细胞病可借鉴家猪进行,同时对于野猪的其他基因的检测提供了一定的科学依据。(2)与M-199培养基、RPMI-1640相比较而言,以PPLO、霉形体为主的自主培养基为最优培养基。(3)通过病原外形、大小、数量的结果综合比较,确定治疗附红细胞体病的首选药物为强力霉素。根据药敏试验效果,选择三种药物对附红细胞感染的野猪进行治疗,强力霉素、土霉素、磺胺间甲氧嘧啶的治愈率分别为87.5%、75%、25%。
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