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肌酸转运载体CrT(creatine transporter)是动物机体吸收转运肌酸的关键蛋白。本试验为研究鸡肌酸转运载体CrT cDNA的结构特征，探讨该基因发育表达特点以及外源添加一水肌酸对其调控作用。运用cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification ofcDNA Ends，RACE)技术克隆得到鸡CrT全序列，并对该序列进行生物信息学分析；采用荧光定量PCR方法检测鸡21日龄CrT mRNA的组织特异性分布，并选用10、12、15、18、21胚龄以及1、21、42、63日龄黄羽肉鸡肠道组织样品，检测鸡CrT mRNA发育性表达变化；从42d起饲料中添加0、250、500、1000mg/kg的一水肌酸继续饲养21d并采集肠道样品，以及通过体外分离培养肠道上皮细胞(Intestinal Epithelial Cell，IEC)，培养基中添加0、0.1、0.25、1、5、10mM的肌酸继续孵育72h，检测其对鸡肠道CrT mRNA表达的影响。研究结果如下： 1.利用RACE方法克隆得到一段2059bp的鸡肠道CrT基因全长cDNA序列(Genbank收录号为JN628439)，其中包括5‘非翻译区(Untranslated Region，UTR)90bp，3’非翻译区220bp，开放阅读框(Open Reading Frame，ORF)1746bp。 2.生物信息软件分析结果表明：鸡CrT基因编码的蛋白序列为582个氨基酸，该基因与人、牛、小鼠和猪在核酸序列上分别有68.44％、67.94％、65.68％、68.32％的同源性；在氨基酸序列上分别有65.16％、66.25％、66.10％、65.94％的同源性；预测CrT有12个跨膜螺旋结构。 3.CrT mRNA在21日龄黄羽肉鸡个组织中广泛表达，其在肌肉表达量最高，肝脏次之，在心、肺、脑以及肠道组织中也有表达。 4.CrT mRNA在10胚龄便可检出，而后下降，15胚龄时有表达高峰，18胚龄时表达量最低，而在出壳时最高(P<0.05)，此时空肠的表达量高于其他两个肠段。而在成鸡阶段：三个肠段的CrT表达模式存在相似规律，即从1日龄起表达量达到最高，而后开始下降，于63日龄时达到最低；而三个肠段相比，在出壳时，空肠的表达量最高，十二指肠次之，回肠最低。 5.试验采用机械剪碎和胶原酶消化结合的方法，成功从18胚龄的鸡胚中原代分离培养小肠上皮细胞，24h内贴壁，3～4d形成细胞群落，5～6d汇合成片，经免疫组化鉴定所得为肠上皮细胞。细胞贴壁后加入含不同浓度的一水肌酸培养基继续培养3天，每日收集细胞用于荧光定量PRC检测CrT mRNA的表达情况。结果表明：添加一水肌酸提高了IEC CrT mRNA的表达量，并在添加量达0.25mM孵育24h时效果最佳(P<0.05)；孵育48h则效果相反；孵育至72h则对CrT影响不显著。 6.在饲料中添加低浓度(250mg/kg)的一水肌酸提高了肠道CrT mRNA的表达水平，并在十二指肠达到显著水平(P<0.05)，随着添加浓度的提高，CrT mRNA表达下降； 以上结果提示：鸡肠道肌酸转运载体CrT mRNA的表达受到日龄以及肠段的影响。短期添加较低浓度的一水肌酸以及在肠道前段可有效促进肠道CrT mRNA的表达，高浓度的一水肌酸反而会抑制肠道CrT mRNA的表达。用不同浓度的一水肌酸处理体外培养的小肠上皮细胞，亦有类似作用结果。