微型抗氧化能力检测方法的建立与中药抗氧化能力的评价

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自由基产生过多或清除过慢,可造成机体的各种损伤,加速机体的衰老进程并诱发各种疾病。抗氧化剂在机体防御自由基中起着重要作用,而中药在抗氧化抗衰老方面独特的疗效,以及现代人利用天然产物预防和治疗疾病观念的更新,使中医药在抗抗氧化抗衰老方面得到了更广泛的开发和利用。因此,寻找清除自由基以及对抗过氧化反应的药物和方法成为自由基医学研究的热点。 本研究考察FRAP、DPPH方法学的基础上,建立微型FRAP、DPPH法,并通过微型FRAP、DPPH法对内源性抗氧化剂(维生素C、维生素E、GSH、a-硫辛酸、β-胡萝卜素)和外源性抗氧化剂(白藜芦醇)进行抗氧化能力检测,以考察其灵敏度和专属性。结果显示,微型FRAP、DPPH法具有良好的线性、精密度、回收率。与传统FRAP、DPPH方法相比,不仅简便、快速、样品用量大大减少外,对Trolox、白藜芦醇、茶多酚的检测结果非常相近,同时这两种方法对维生素E、维生素C和白藜芦醇都有很好的灵敏度和专属性。 在细胞炎症模型研究中,采用血管内皮细胞为观察对象,AngⅡ和Ox-LDL可引起血管内皮细胞炎症(炎性因子表达)和PPARs(PPARa、PPARB和PPARγ)表达的改变,AngⅡ则抑制其表达,Ox-LDL刺激其表达增加。 在对几种中药总黄酮提取物进行的抗氧化能力评价中,发现桑枝、野菊花、紫苏总黄酮无论是在直接进行抗氧化检测还是作用于AngⅡ细胞炎症模型后,都显示了较强的抗氧化能力,同时LPS&IFN-γ炎症模型显示,桑枝总黄酮具有较好的干预炎症效果,而在基因表达考察中,桑枝总黄酮提取物(1μg/mL)、紫苏总黄酮提取物(100μg/mL)干预.AngⅡ模型可刺激PPARγ的表达增加。综合这些结果,提示桑枝总黄酮提取物是抗炎、抗氧化较好的候选物,具有进一步研究的价值。 微型抗氧化能力检测方法可以加速评价物质的抗氧化能力。微型抗氧化能力检测与传统紫外法相比,在评价质量上没有明显区别,同时它对对内源性和外源性抗氧化物质均显示很好的灵敏度和专属性。运用微型抗氧化能力检测法和细胞炎症模型可加快对天然抗氧化剂的评价,为中药抗氧化剂的筛选提供依据。
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