益气活血方对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及其调控相关因子的影响

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目的:通过研究益气活血方对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及Bax、Bcl-2及Caspase-3的影响,探讨益气活血方对糖尿病周围神经病变的干预作用,为该方在临床应用提供实验依据。方法:将40只雄性健康Wistar大鼠,体重240-260g。适应性饲养1周后,随机抽取10只作为正常对照组,给予常规饲养;余30只给予实验造模,喂养高糖高脂饲料。于第4周末,实验组给予链脲佐菌素STZ(溶于0.1mol/L柠檬酸盐缓冲液中,pH4.3,4℃)45mg/kg一次性腹腔注射,对照组腹腔注射等体积的柠檬酸盐缓冲液。在第6周末,实验组大鼠测血糖≥16.7mmo1/L,且存在胰岛素抵抗者,即成模型,成模率90%,共27只。将成模的大鼠27只随机分为模型组、中药组、西药组3组,每组9只。中药组给益气活血方药(25g/kg.d)灌胃,西药组给予弥可保(0.5mg/kg.d)灌胃,对照组和模型组用相同体积蒸馏水灌胃,每日1次,给药干预8周。实验周期内,测量大鼠的体重及血糖,并观察其一般情况。实验结束,用TUNEL法检测神经细胞的凋亡水平和免疫组化方法测定bax、bcl-2和caspase-3的表达。结果:1各组大鼠一般情况实验期间,对照组大鼠基本情况正常;在第3周后,实验组缓慢出现多饮、多尿、精神萎靡,毛色暗淡无光泽;第4周实验组腹腔注射STZ造模4天后,大鼠出现不安定,反应迟钝,被毛蓬松,臀部毛色发黄,逐渐消瘦;饮水量、食量及尿量明显增加,大便不成形,笼中垫料酸腐等症状;出现糖尿病周围神经病变症状。从第6周开始给予药物干预连续8周期间,除模型组外,中药组、西药组大鼠症状逐渐减轻,效果随治疗时间延长较为明显。2大鼠体重、血糖变化2.1大鼠体重变化1周末时,各组体重差异无统计学意义(P>0.05)。4周末时,各组体重差异有统计学意义(P<0.001)。与正常对照组相比,各组大鼠体重均有增加(P<0.05);模型组、西药组、中药组,差异无统计学意义(P>0.05)。6周末时,各组体重差异有统计学意义(P<0.001)。与正常对照组相比,各组大鼠体重均有增加(P<0.05);模型组、西药组、中药组,差异无统计学意义(P>0.05)。药物干预8周后,各组之间差异显著,有统计学意义(P<0.001)。与正常对照组相比,各组大鼠体重均下降(P<0.05),以模型组最为明显>西药组>中药组,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.2大鼠血糖变化1周末时,各组血糖差异无统计学意义(P>0.05)。4周末时,各组血糖差异有统计学意义(P<0.001)。与正常对照组相比,各组大鼠血糖均有增加(P<0.05);模型组、西药组、中药组,差异无统计学意义(P>0.05)。6周末时,各组血糖差异有统计学意义(P<0.001)。与正常对照组相比,各组大鼠血糖均有增加(P<0.05);模型组、西药组、中药组,差异无统计学意义(P>0.05)。药物干预8周后,各组之间差异显著,有统计学意义(P<0.001)。与模型组相比,中药组血糖降低明显(P<0.05);西药组对降低血糖有意义,但是不明显(P>0.05);中药组和西药组相比降糖效果明显(P<0.05)。3坐骨神经细胞凋亡检测结果正常对照组坐骨神经细胞凋亡较少,各组大鼠凋亡细胞均显著增多(P<0.05);与模型组相比,弥可保组和益气活血方组大鼠坐骨神经凋亡细胞均显著减少(P<0.05),以中药组更为明显。4Caspase-3、Bcl-2及Bax的变化与正常对照组相比,其余三组Caspase-3、 Bax的表达均显著增多,Bcl-2明显降低,有统计学差异(P<0.05)。与模型组相比,中药组和弥可保组Caspase-3、 Bax的表达均显著减少,Bcl-2明显提高,差异有统计学意义;中药组与弥可保组向比较,中药组具有显著差异。结论:1对于糖尿病的大鼠一般情况、体质量、血糖方面,益气活血方的干预作用优于弥可保。2糖尿病大鼠坐骨神经存在广泛的细胞凋亡,造成DPN。3细胞凋亡被Caspase-3、bcl-2、bax所调控。4益气活血方能改善糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及调控因子,Caspase-3、bax的表达减少,bcl-2表达增多,对DPN有一定的防治作用。
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