人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在人群中感染普遍,能够在免疫功能不全的病人中引起严重的疾病,特别是器官移植病人、艾滋病患者以及有先天性HCMV感染的新生儿。目前还没有运用于临床的HCMV疫苗。虽然临床上已经有一些针对HCMV感染的治疗性药物,但存在毒性及耐药性等问题,因此研发出有效预防HCMV感染的疫苗尤为重要。病毒样颗粒(virus-like particle VLP)疫苗是一种新型的亚单位疫苗。VLP是不含病毒基因组,不具有病毒复制能力的多聚蛋白结构。乙肝病毒核心抗原(hepatitis B virus core protein,HBcAg)作为蛋白载体可以提高目的抗原的免疫原性,在VLP疫苗研究中运用广泛。本实验室前期研究表明,与HCMV UL83基因同源的小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)M84基因在小鼠体内能够引起较强的细胞免疫应答,有效抵抗致死量病毒感染。在本文中,将M84的一段含有一个T细胞优势表位的基因序列与HBcAg基因共表达制成VLP疫苗(简称HBc-M84ep),以MCMV感染Balb/c小鼠为模型,探究HBc-M84ep蛋白抗致死量MCMV攻击的保护效果。本研究分为两个部分。(一)HBc-M84ep亚单位疫苗的制备:选取HBcAg的1-149位氨基酸序列,将含有M84优势表位(297AYAGLFTPL305)的一段51个氨基酸序列插入并替换掉HBcAg的75-84位氨基酸,构建好的重组质粒转化到大肠杆菌中表达,表达出的蛋白经过裂解、超声破碎、Ni-珠纯化、超滤等一系列操作得到单一的目的蛋白,即HBc-M84ep蛋白,经western blotting鉴定得到确认。(二)HBc-M84ep亚单位疫苗的免疫保护效果:选取6-8周龄的小鼠随机分组,分别用1μg、6μg、30μg剂量的HBc-M84ep蛋白单独或辅以MF59佐剂进行腹腔免疫,免疫两次,间隔三周。未免疫组小鼠作为对照。第二次免疫三周后用致死量MCMV攻击小鼠。结果发现,剂量为1μg的HBc-M84ep蛋白单独免疫小鼠不能为小鼠提供抗致死量MCMV的感染,与对照组小鼠一样,在攻毒后的7天内全部死亡;6μg和30μg HBc-M84ep蛋白单独免疫小鼠能为小鼠提供部分保护,存活率仅为10%和40%。在该蛋白疫苗中添加MF59佐剂后,1μg、6μg和30μg蛋白剂量均能为小鼠提供较好的保护,其中免疫1μg剂量的小鼠其存活率达90%,免疫6μg或30μg剂量的小鼠存活率都达到100%。此外,完全保护组或保护率较高的组别与对照组或保护效果较差的组别相比,器官(包括脾脏和唾液腺)病毒滴度以及特异性抗体滴度都有着显著性差异。研究结果表明,在乙肝病毒核心抗原基因序列中插入MCMV M84的一个优势表位序列,表达出的HBc-M84ep蛋白辅以MF59佐剂免疫小鼠,能为小鼠抗致死量MCMV攻击提供有效保护,保护效果与疫苗剂量成正相关。该研究为研制新型HCMV疫苗提供了参考。