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肝癌是常见的恶性肿瘤,在非洲以及西太平洋地区(包括中国)发病率最高,已经严重影响公共健康。由于肝癌发病隐匿、恶性度高,仅有25%的肝癌患者能够接受外科手术治疗。因此,肝癌的非手术治疗得到高度重视,不断涌现新的治疗技术和方法,其中就包括了高强度聚焦超声(High-intensity focused ultrasound,HIFU)。但是在HIFU的应用中存在消融时间长、声波能量被干扰、靶区组织残留等问题。提高HIFU的治疗效率,是HIFU技术进一步推广应用必须解决的问题。国内外学者做了大量实验已经证实了超声造影剂能够增强HIFU的消融作用。超声造影剂能够增强血流中红细胞的背向散射信号,改善超声图像的清晰度和对比度,提高超声诊断的准确性。靶向超声造影剂使超声影像跨入到特异性的靶向分子成像水平。靶向超声微泡作为药物载体,在得到超声造影图像的同时,还可以实现药物的靶向释放,增强局部药物浓度及药物疗效。有学者制备出包载抗肿瘤药物的超声微泡,并研究了其对肿瘤细胞的毒性作用。但是将包载抗肿瘤药物的靶向超声造影剂与HIFU联合起来消融肿瘤,探求靶向载药超声造影剂对HIFU消融增强效应及影响的研究相对较少。本研究拟制备VEGFR-2靶向载5-FU聚乳酸-羟基乙酸超声造影剂,研究其特性,为下一步研究靶向载药超声造影剂对HIFU消融增强效应及影响奠定实验基础。本实验分为以下三个部分:(1)载5-FU聚乳酸-羟基乙酸超声造影剂制备及其特性。采用复乳化-溶剂挥发法与冷冻干燥法制备载5-FU聚乳酸-羟基乙酸超声造影剂;通过观察其形态、结构、粒径分布以及载药量,筛选出载5-FU超声造影剂的最佳制备方案。实验结果表明5%PVA,10%SP-80为最佳制备条件,制备出的载5-FU超声微泡呈规则球形,表面光滑,内部中空,大小均一性良好,平均粒径为(289.4±50.8)nm,载药量为0.5%。(2)载5-FU聚乳酸-羟基乙酸超声造影剂体外实验。采用最佳制备方案制备出载5-FU超声造影剂;通过体外显影实验观察其体外造影能力;通过CCK-8细胞毒性实验观察其对人肝癌细胞株HepG2的细胞毒性,并与聚乳酸-羟基乙酸超声造影剂做比较。实验结果表明制备的载5-FU超声造影剂具备造影能力和对人肝癌细胞株HepG2的细胞毒性作用。(3)VEGFR-2靶向载5-FU聚乳酸-羟基乙酸超声造影剂制备及体外寻靶实验。采用碳二亚胺法制备VEGFR-2靶向载5-FU超声造影剂,并检测其粒径分布及Zeta电位,与载5-FU超声造影剂做比较;制备RH-123标记的VEGFR-2靶向载5-FU超声造影剂,荧光显微镜观察其形态,免疫荧光实验观察其在体外与HUVECs结合情况,并与RH-123标记的载5-FU超声造影剂做比较。实验结果显示VEGFR-2靶向载5-FU超声造影剂平均粒径为(374.5±79.1)nm,Zeta电位为-5.05mv;载5-FU超声微泡平均粒径为(289.4±50.8)nm, Zeta电位-11.7mv;RH-123标记VEGFR-2靶向载5-FU超声造影剂呈球形,分散度好,在蓝光激发下呈绿色荧光;免疫荧光实验观察到VEGFR-2靶向载5-FU超声微泡大量粘附到HUVECs表面,载5-FU超声微泡与HUVECs无粘附,表明VEGFR-2靶向载5-FU超声造影剂在体外具备良好的VEGFR-2靶向性。