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[目的]通过染氟支持细胞和淋巴细胞体外共培养后Fas/FasL系统相关基因和蛋白表达的检测,来探讨氟对睾丸支持细胞免疫豁免的毒性机理,从而为支持细胞协助器官移植方面提供理论依据。[方法]本实验设置了不同剂量氟影响下的支持细胞和淋巴细胞共培养,模拟体内睾丸曲细精管中二者的相互作用。通过MTT和TUNEL检测了淋巴细胞的相对存活率和凋亡率；应用QRT-PCR和western blot检测了染氟支持细胞内FasLmRNA和FasL蛋白的表达变化；同时也检测了共培养后淋巴细胞内Fas蛋白的表达和Fas、caspase8和caspase3 mRNA的表达变化。[结果](1)支持细胞鉴定结果：荧光显微镜的蓝光激发下,可见支持细胞相互交织,都像膜一样铺成一层,胞体呈现绿色荧光。计数后可以发现支持细胞的纯度在90%左右,活性达95%以上。可以用来建立细胞模型。(2)氟对淋巴细胞相对存活率影响MTT结果显示：随着氟化钠浓度的上升,淋巴细胞的相对存活率呈现下降趋势,10-6、10-5、10-4mol/L组与对照组淋巴细胞相对存活率相比变化不明显,10-3mol/L组的氟浓度对淋巴细胞相对存活率影响极大,与对照组相比差异极显著。(3)共培养后淋巴细胞相对存活率MTT结果显示：淋巴细胞的相对存活率随着支持细胞攻氟浓度的增加也呈现上升趋势,10-6、10-5mol/L的染氟浓度下,淋巴细胞的相对存活率与对照组相比差异不显著；10-4mol/L组与对照组相比差异显著,10-3mol/L组支持细胞对淋巴细胞相对存活率影响最小,差异极显著。(4)共培养后淋巴细胞凋亡率TUNEL结果：与不同染氟浓度的支持细胞共培养后,淋巴细胞的凋亡率都有所变化,趋势是随着氟化钠浓度的升高而降低,与对照组相比,10-6mol/L组的细胞凋亡率差异不显著(P>0.05); 10-5mol/L组与对照组相比凋亡显著(p<0.01); 10-4mol/L组差异极显著(p<0.01); 10-3mol/L组差异极极显著(5) western blot结果显示：与对照组相比支持细胞各实验组FasL蛋白表达水平有所下降,低剂量(10-5)染氟时,FasL达到显著性差异,10-4和10-3 mol/L的染氟剂量,FasL的表达与对照组相比差异极显著；共培养后淋巴细胞中Fas的表达呈下降趋势,低剂量染氟组淋巴细胞中Fas的表达差异不显著,10-4和10-3mol/L的支持细胞染氟剂量,淋巴细胞中Fas的表达差异极显著。(6) QRT-PCR结果显示：与对照组比,支持细胞FasL mRNA的表达量随着染氟浓度的升高呈现下降趋势；其中10-5mol/L的氟浓度,FasL mRNA的表达无显著性变化；染氟后与对照组组比,10-4、10-5mol/L的氟浓度,FasL mRNA的表达显著升高；共培养后各组淋巴细胞中Fas、caspase3-caspase8三个基因mRNA的表达量与对照组相比,有所下降。其中,Fas、caspase3和caspase8的10-3mol/L氟暴露组与对照组相比,mRNA的表达量均达到显著性差异； Fas和caspase3的10-4mol/L氟暴露组与对照组相比,差异显著；Fas的10-5mol/L氟暴露组与对照组相比,差异显著；[结论]氟通过降低支持细胞FasL基因和蛋白的表达,影响了支持细胞杀伤淋巴细胞的功能,降低了支持细胞的免疫豁免功能。