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利用显色法芯片技术建立快速鉴定分枝杆菌菌种的方法。根据美国国家生物技术信息中心(the National Center for Biotechnology Information, NCBI)提供的分枝杆菌16S rDNA基因的保守区和突变区(第129 ~ 267位核苷酸的A突变区、第430 ~ 500位核苷酸的B突变区)分别设计引物和寡核苷酸探针,用地高辛标记引物并制备玻璃芯片。采用双重PCR技术分别对16种和27种分枝杆菌标准株、5种非分枝杆菌标准株和221株分枝杆菌临床分离株(110株鉴定为结核分枝杆菌复合群;另111株鉴定为非结核分枝杆菌)进行扩增,扩增产物分别与玻璃芯片进行杂交检测,尼龙膜显色,以显现蓝黑色斑点作为阳性信号,并根据其在芯片方阵中的位置判断分枝杆菌种类。根据芯片杂交结果,选取部分经显色法芯片技术检测的临床分离株进行DNA测序。16种和27种分枝杆菌标准株和221株分枝杆菌临床分离株经PCR扩增均各产生2条DNA片段,其中1条长度为272 ~ 280 bp,1条长度为183 ~ 192 bp。27种分枝杆菌标准株均与芯片上特异性探针杂交,221株均与分枝杆菌属探针a杂交,106株确定为结核分枝杆菌复合群,37株龟、脓肿分枝杆菌复合群,16株为不产色分枝杆菌,10株为胞内分枝杆菌,8株鸟分枝杆菌,7株戈登分枝杆菌,7株为瘰疬分枝杆菌,5株浅黄分枝杆菌,4株为猿猴分支杆菌,4株海分枝杆菌,3株堪萨斯分枝杆菌,3株为偶然分支杆菌,1株土地分枝杆菌,1株草分枝杆菌,1株鸟、胞内分枝杆菌混合株,1株结核、海、土地分枝杆菌混合株,另7株只与分枝杆菌属探针a杂交,经测序分析显示4株为结核分枝杆菌突变株,1株为鸟分枝杆菌突变株,1株为Mycobacterium lentiflavum,1株为Mycobacterium arupense,芯片上无这两种菌株的特异性探针。显色法芯片技术能简便、快速、灵敏、特异地将大多数分枝杆菌鉴定到种,具有一定的临床推广应用价值。