骨髓间充质干细胞对大鼠足细胞损伤的保护作用的研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:szscan
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目的:探讨大鼠BMSCs对大鼠肾脏足细胞损伤的保护作用研究。方法:1.从SD大鼠骨髓中提取MSCs,经体外扩增、纯化并进行鉴定。2.从SD大鼠肾脏中提取足细胞,经体外培养、并进行鉴定。3.体外实验,分组:正常组:足细胞;阿霉素组:足细胞+阿霉素(2ug/ml);干细胞组:足细胞+BMSCs(共培养24h)+阿霉素(2ug/ml)。各实验组干预24h、48h、72h后通过流式细胞术检测各组足细胞的凋亡率。12h、24h、48h后通过RT-PCR和Real time PCR测nephrin、synaptopodin mRNA的表达。Western bolt技术检测各组24h、48h、72h足细胞骨架相关蛋白nephrin、synaptopodin的表达。结果:1.流式细胞仪结果示:24h正常组凋亡率为19.1%,24h阿霉素组凋亡率为45.4%,24h干细胞组凋亡率为22.7%,24h干细胞组与阿霉素组相比足细胞的凋亡显著减少,减少有统计学意义(P<0.01)。48h正常组凋亡率为22.4%,48h阿霉素组凋亡率为32.5%,48h干细胞组凋亡率为26.2%,48h干细胞组与阿霉素组相比足细胞的凋亡减少,减少无统计学意义(P>0.05).72h正常组凋亡率为17.7%,72h阿霉素组凋亡率为29.6%,72h干细胞组凋亡率为28.7%,72h干细胞组与阿霉素组相比足细胞的凋亡减少,减少无统计学意义(P>0.05)。2.RT-PCR电泳示:12h、24h、48h各时间点正常组、阿霉素组和干细胞组nephrinmRNA的表达无明显差异。24h和48h阿霉素组和干细胞组synaptopodin mRNA的表达比正常组减少,24h和48h干细胞组synaptopodin mRNA的表达比阿霉素组明显增加。3. Real time PCR结果示:12h、24h、48h各时间点正常组、阿霉素组和干细胞组nephrin mRNA的表达无明显差异。48h阿霉素组和干细胞组synaptopodin mRNA的表达比正常组减少,48h干细胞组synaptopodin mRNA的表达比阿霉素组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。4. Western bolt结果示:24h、48h、72h正常组、阿霉素组和干细胞组nephrin蛋白的表达无明显差异。48h干细胞组与阿霉素组相比synaptopodin蛋白表达明显增高,24h、72h正常组、阿霉素组和干细胞组synaptopodin的表达无明显差异。结论:1.大鼠BMSCs在体外可以保护阿霉素诱导的足细胞的凋亡。2.大鼠BMSCs能够增加阿霉素诱导损伤的足细胞synaptopodin mRNA的表达。3.大鼠BMSCs能够增加阿霉素诱导损伤的足细胞synaptopodin蛋白的表达。
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