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目的:观察臭氧关节腔注射治疗后,兔膝骨性关节炎模型中滑膜的病理改变及其一氧化氮合酶(NOS)和转化生长因子β(T G F-β)的变化,进一步探讨臭氧治疗骨性关节炎的作用。 方法:将24只成年新西兰兔随机分为4组,即正常组(A组)、模型组(B组),假治疗组(C组),臭氧组(D组),每组6只。A组不做任何处理作为正常对照,B-D组都采用Vandman法将兔的左膝关节用石膏固定于伸直位6周,造成兔膝骨性关节炎模型后,分别将空气1ml注入 C组兔的左膝关节腔内,40μg/ml臭氧1ml注入D组兔的左膝关节腔内,每周一次,连续两周。治疗结束后一周处死兔子大体观察膝关节有无关节积液、肿胀及滑膜炎表现,测定膝关节滑膜厚度,取关节滑膜标本进行HE染色于光镜下观察病理变化,免疫组化检测滑膜组织中一氧化氮合酶和转化生长因子β阳性细胞的表达水平。 结果:1.大体观察:正常组:关节软骨外观呈蓝白色,色泽明亮,无裂纹及软化,滑膜无明显增厚,关节内只有少许清亮滑液。模型组:膝关节强直于伸直位,被动活动基本丧失,软骨表面变得粗糙,并有裂纹、糜烂和溃疡形成,滑膜充血、水肿,明显增厚,关节积液较多,呈黄色(图4)。假治疗组:软骨表面粗糙,缺损明显,滑膜明显增厚,关节积液多,部分浑浊,呈血性积液。臭氧组:关节面较光滑,滑膜稍增厚,关节积液较少,无混浊血性积液。2.膝关节滑膜厚度的测定结果:各组与正常组比较,膝关节滑膜厚度均显著增高(P<0.01),模型组与假治疗组比较无统计学意义(P>0.05),臭氧组较假治疗组滑膜厚度显著降低(P<0.05)。3.滑膜组织HE染色光镜观察:正常组:滑膜上皮细胞呈单层、扁平、立方状分布,未见细胞增生,滑膜组织结构正常,无组织水肿、变性、坏死,无血管扩张充血,无炎性细胞浸润、炎性肉芽组织及纤维组织增生等病理性改变(图5)。模型组:滑膜上皮细胞中度、重度增生,呈乳突状、结节状,细胞层次增多,排列混乱,滑膜组织结构破坏,组织水肿、变性、坏死,伴有血管扩张充血,中度、重度炎性细胞浸润,炎性肉芽组织及纤维组织增生(图6)。假治疗组:滑膜上皮细胞中度、重度增生,细胞层次增多,排列混乱,滑膜组织结构破坏,伴有血管扩张充血,中度、重度炎性细胞浸润,炎性肉芽组织及纤维组织增生(图7)。臭氧组:滑膜上皮细胞轻度、中度增生,细胞排列稍混乱,滑膜组织结构基本正常,部分仍可见血管扩张充血,有轻度、中度炎性细胞浸润(图8)。4.滑膜中一氧化氮合酶(NOS)阳性表达观察:正常组:少量表达于滑膜细胞胞浆,呈浅棕黄色、颗粒状(图9)。模型组:大量表达于滑膜细胞胞浆,呈深棕黄色(图10)。假治疗组:大量表达于滑膜细胞胞浆,呈深棕黄色(图11)。臭氧组:较少量表达于滑膜细胞胞浆,呈浅棕黄色(图12)。平均光密度比较:各组与正常组比较平均光密度均显著降低(P<0.05),模型组与假治疗组比较无统计学意义(P>0.05),臭氧组较假治疗组平均光密度显著增高(P<0.05)。(注:所测量之平均光密度实为透光度,故测量值与免疫组化表达强度呈反比关系,即测量值越低免疫组化表达越强,测量值越高免疫组化表达越弱。)5.滑膜中转化生长因子β(T G F-β)阳性表达观察:正常组:大量表达于滑膜细胞胞浆,呈深棕黄色(图13)。模型组:少量表达于滑膜细胞胞浆,呈浅棕黄色(图14)。假治疗组:少量表达于滑膜细胞胞浆,呈浅棕黄色(图15)。臭氧组:较大量表达于滑膜细胞胞浆,呈深棕黄色(图16)。平均光密度比较:各组与正常组比较平均光密度均显著增高(P<0.05),模型组与假治疗组比较无统计学意义(P>0.05),臭氧组较假治疗组平均光密度显著降低(P<0.05)。(注:所测量之平均光密度实为透光度,故测量值与免疫组化表达强度呈反比关系,即测量值越低免疫组化表达越强,测量值越高免疫组化表达越弱。) 结论:1.兔膝关节骨性关节炎模型关节腔内注射40μg/ml浓度的臭氧可以明显减轻滑膜炎症,抑制滑膜中NOS释放及促进TGF-β的释放。2.减轻滑膜炎症,抑制滑膜中NOS释放及促进TGF-β的释放可能是臭氧治疗OA的主要机制之一。