NDV7793对小鼠结肠癌肝转移的抑制作用

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mjynht
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
研究背景和目的据统计全球肿瘤新发病例中,结直肠癌新发病例超过120万,死亡病例约60.87万,在男性肿瘤新发病例中居第3位,女性肿瘤新发病例中居第2位,其中有60%~70%的患者死亡时存在结肠癌的肝转移。对于结肠癌的治疗,除了少数可行手术根治术外,绝大部分结肠癌患者因不具备手术条件,治疗手段以化疗为主。然而化疗的毒副作用及其所引起的多种并发症仍是肿瘤治疗方面的一大难题,所以医生们将目光投向生物治疗。靶向治疗作为肿瘤生物治疗手段之一,为降低化疗药物的毒副作用增加其疗效带来了福音,可以作为化疗的补充。虽然目前已有西妥昔单抗、帕尼单抗等靶向治疗药物为NCCN(National comprehensive cancer Network,美国国立综合癌症网络)治疗指南所推荐,但新的靶向药物的研发、化疗药物联合生物治疗及其他生物疗法的研究仍在不断进行中。病毒抗肿瘤治疗为肿瘤生物疗法之一,目前已经过临床评估的抗肿瘤病毒主要包括腺病毒、单纯疱疹病毒、呼肠病毒、牛痘病毒以及新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)。作为鸟类副粘病毒科下副黏病毒属的新城疫病毒,自被发现其具有抗癌潜能以来,关于NDV抗肿瘤的研究已成为经久不衰的课题。NDV对肿瘤细胞的特异性杀伤作用已经得到了基础实验和临床应用上的证实。NDV的各种抗肿瘤机制随着众多研究成果的产生也逐渐明朗和系统化。已有临床应用证实NDV修饰的自体瘤对大肠癌肝转移病人的治疗有良好的效果。在美国,NDV被NC(INational cancer institute,美国国家癌症研究所)列为候选抗肿瘤药物。我们课题组自2004年以来,利用分离得到的NDV弱毒株NDV7793进行抗瘤的基础研究,证实NDV7793不但在体外对人结肠癌细胞有杀伤作用,而且能抑制裸鼠结肠癌的生长。5-Fu作为结肠癌中重要的基础化疗药物之一,应用于大肠癌的临床治疗已近50年。但是近年来越来越多的患者对5-Fu产生了耐药,使得5-Fu的疗效大为降低。因此为提高5-Fu的疗效并降低5-Fu的毒副作用,5-Fu联合联合生物治疗的研究得到不断的开展。本课题旨在研究NDV7793对小鼠结肠癌肝转移的抑制作用,同时探讨NDV7793与5-Fu联合治疗的效果,以及NDV7793对结肠癌肝转移模型小鼠免疫功能的影响,为NDV7793应用于临床实践提供实验依据。研究内容和方法1.小鼠结肠癌肝转移模型的建立常规培养小鼠结肠癌CT26细胞。通过脾脏注射脾脏保留法,将约1×106个小鼠结肠癌细胞CT26注射至小鼠脾脏包膜下建立小鼠结肠癌肝脏转移模型。待小鼠自然死亡后,观察小鼠腹腔内成瘤情况,取肝脏作HE染色。2. NDV7793对小鼠结肠癌肝转移的抑制采用鸡胚种植法培养扩增NDV7793病毒,并用超速离心法将之纯化,备用。分组给药:将结肠癌肝转移小鼠模型随机分为PBS阴性对照组,5-Fu阳性对照组,NDV7793给药组,NDV7793联合5-Fu给药组。每组20只小鼠,腹腔注射给药,0.1mL/只,从建模当天开始连续给药10天。每组随机选取10只小鼠,用重复测量法分析各组药物对小鼠体重的影响,并对各组小鼠进行生存分析。剩余小鼠于给药结束后第6天处死,取各组小鼠完整肝脏,先称量小鼠肝脏重量比较各组抑瘤率;然后大体观察比较各组肝脏表面结肠癌转移情况,再作常规包埋、切片、HE染色进行光镜下病理学分析,并进行癌灶计数。3. NDV7793对结肠癌肝转移模型小鼠免疫功能的影响小鼠结肠肝转移模型的建立及实验分组、给药,同上所述。于停药后第6天处死各实验组小鼠,并称量各组小鼠胸腺及体重以计算胸腺指数;细胞因子的检测:称取各实验组处死后小鼠的肝脏,采用手工玻璃匀浆法对肝脏匀浆,获取上清液,用ELISA方法分别检测各组小鼠肝脏匀浆上清液中的IL-2、IFNγ、TNFα、IL-17表达水平。正常对照组为随机法获取的同龄10只健康小鼠,每日给每只小鼠腹腔注射PBS缓冲液0.1ml,连续注射10日,也于停药后第6天处死。研究结果1.成功构建小鼠结肠癌肝转移模型,建模成功率为90%(27/30)。2.对小鼠结肠癌肝转移的抑制效果1)与PBS阴性对照组相比,NDV7793给药组可减缓小鼠体重的增长速率;5-Fu阳性对照组在5-Fu给药期间小鼠体重增长受抑制,甚至使小鼠体重快速减轻;联合给药组在NDV7793给药期间减缓小鼠体重的增长速率、在5-Fu给药期间小鼠体重下降。2)对各组进行生存分析可得:NDV7793给药组生存期短于联合给药组(P=0.000<0.001),但是显著长于5-Fu阳性对照组以及PBS阴性对照组,差异具统计学意义(P=0.000<0.001)。3)对各组抑瘤率统计分析可得:NDV7793给药组、联合给药组、5-Fu阳性对照组在建模后的16天内都对小鼠结肠癌肝转移有抑制作用,NDV7793给药组的抑瘤率高于5-Fu阳性对照组(P=0.000<0.01);但是NDV7793给药组的抑瘤率与联合给药组相比较,差异无统计学意义(P=0.871>0.05)。4)对于肝脏癌灶计数情况的观察:NDV7793给药组的肝脏癌灶数量要少于5-Fu阳性对照组及PBS阴性对照组(P=0.000<0.01);而NDV7793给药组与联合给药组比较,癌灶减少数相差不大(P=0.733>0.05)。5)大体标本观察可见:PBS阴性对照组几乎整个肝脏被癌灶所浸润,其表面少见正常组织;5-Fu阳性对照组癌灶范围达90%以上;NDV7793给药组和联合给药组的癌灶范围仅为肝脏的1/2左右。6)病理学检查结果显示:与PBS阴性对照组相比,NDV7793给药组、联合给药组小鼠癌灶中细胞形态模糊,细胞坏死或凋亡范围较大。3.对于小鼠免疫功能的影响1)NDV7793给药组的胸腺指数高于联合给药组(P=0.004<0.01);联合给药组胸腺指数高于PBS阴性对照组和5-Fu阳性对照组(P=0.000<0.01)。2)NDV7793给药组小鼠肝脏组织的IL-2表达水平明显高于PBS阴性对照组(P=0.000<0.05)以及5-Fu阳性对照组(P=0.000<0.05);NDV7793给药组肝脏IL-2表达水平低于联合给药组(P=0.000<0.05)。3)肝脏组织IFNγ检测水平显示:NDV7793给药组IFNγ表达水平高于PBS阴性对照组(P=0.000<0.05)和5-Fu阳性对照组(P=0.005<0.05),且明显低于联合给药组(P=0.000<0.05)。4)TNFα检测结果显示:NDV7793给药组TNFα表达水平高于PBS阴性对照组(P=0.000<0.05)和5-Fu阳性对照组(P=0.000<0.05),且低于联合给药组(P=0.000<0.05)。5)IL-17检测结果显示:NDV7793给药组IL-17表达水平高于PBS阴性对照组(P=0.022<0.05),低于联合给药组(P=0.000<0.05),但与5-Fu阳性对照组无显著性差异(P=0.074>0.05)。结论1.本实验成功构建结肠癌肝转移小鼠模型。2. NDV7793对小鼠结肠癌肝转移的抑制作用比5-Fu的抑瘤效果更佳,与5-Fu联合应用后,虽然生存期有所延长,但抑瘤效果并未得到增强。3. NDV7793可以改善荷瘤小鼠的免疫功能。NDV7793还可上调结肠癌肝转移小鼠肝脏中IL-2、IFNγ、TNFα以及IL-17的水平,且与5-Fu联合应用后效果更佳。
其他文献
当今,随着经济与社会的发展,人类面临着日益严重的生态环境问题和能源问题,这使得人们开始反思工业化大生产,以及建立在此基础上的消费型社会模式。在建筑规划界,生态与可持续已成
伴随着师资数量的增多,对教师们的管理业因为越发庞大的数量而变得复杂,导致了学校在教师管理以及培养方面的维护管理工作更加困难和复杂,同时工作人员的工作量以及对数据的
研究背景:支气管哮喘是由多种炎症细胞如嗜酸性粒细胞(EOS)、肥大细胞、T淋巴细胞及多种细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病,并且通常以气道上皮的结构改变为病理特征。支气管
本文通过对企业行政管理理论进行分析研究,对当前制约企业行政管理的问题进行了剖析,并对如何优化企业行政管理水平,结合实际情况提出了相应的对策和建议。
目的:研究维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)基因的单核甘酸多态性(SNP)位点rs11568820、rs2228570、rs3782905和维生素D结合蛋白(vitamin D binding protein,DBP)基因SNP位点rs704
老峨山旅游景区的旅游资源具有种类多样、历史悠久、深厚文化内涵等特点。目前,老峨山旅游景区在旅游资源整合、景区主题、管理制度、旅游产品包装等方面存在问题。本文就老
近几年,随着国内微博不断发展和完善,微博的用户数量得到飞速增长,影响力也不断增强,图书馆在使用传统服务方式为读者服务的同时,也开始尝试使用微博以更好地服务于读者。目
选题,是为新闻"立魂"。电视新闻专题的选题,力戒千人一面,似曾相识;重复累赘,叠床架屋;过俗过滥,观点加例子。选题必须彰显时代感,要站在时代高塔上选题,从最能体现时代精神的
当我们对犯罪过程进行回顾时时常会发现,被害人在犯罪的发生、发展过程中有着举足轻重的作用,甚至在一些情况下,没有被害人过错行为就不会有犯罪行为的发生。被害人过错的核
背景:比较含或者不含长春瑞滨化疗方案在乳腺癌新辅助化疗中的作用,通过对临床随机对照试验的荟萃分析来研究含有长春瑞滨的新辅助化疗方案是否改善病理完全缓解率(pCR),总体有效