盾叶薯蓣优良品系的筛选、离体快繁和多倍体诱导的研究

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盾叶薯蓣为多年生草质藤本植物,是我国传统中药材。其主要活性成分为薯蓣皂素,是合成甾体激素类药物的重要原料,具有较高的医用和经济价值。随着现代医学技术的不断发展及对盾叶薯蓣开发的不断深入,市场需求量逐年增加。由于长期的滥采滥挖,丰富的野生资源逐渐枯竭。目前,人工栽培为盾叶薯蓣原料来源的主要方式。  由于缺乏优良的栽培品系,人工栽培中已出现种质严重衰退、薯蓣皂苷元含量下降等问题,严重制约了我国盾叶薯蓣产业的可持续发展。因此,选育、推广优良品系,是提高盾叶薯蓣经济效益的重要措施。主要研究内容及结果如下:  1.优良品系的筛选:每个品系中选取30株长势好、无病虫害的植株,以皂素含量和根状茎产量为主要筛选指标。结果表明,9个品系中,H2及H8的皂素含量和根状茎产量均高于其他品系,可用于组培快繁实验研究。  2.组培快繁体系的建立:从外植体的选择、愈伤组织诱导、继代培养、生根、炼苗和移栽等方面对H2品系进行研究。结果表明,带芽茎段为最优外植体材料;最适愈伤组织诱导培养基为MS+2.0 mg·L-16-BA+1.0 mg·L-1 NAA+0.4 mg·L-1 ZT,诱导率达88.0%;最适增殖培养基为MS+1.0 mg·L-16-BA+1.0 mg·L-1 NAA,增殖倍数为7.70;最适生根培养基为1/2 MS+0.5 mg·L-1 NAA,生根率达94.4%,平均生根数为13.33;最适移栽基质为田园土∶珍珠岩=3∶1,成活率达96%。  3.多倍体的诱导:采用含不同质量浓度的秋水仙素、二甲基亚砜(DMSO)和CaCl2的混合水溶液,对胚性愈伤组织进行处理。结果发现:在0.2%秋水仙素+0.02 g·mL-1DMSO+3 mmol·L-1 CaCl2溶液中,浸泡2h,四倍体诱导率达40.74%;  4.外部形态比较:研究发现四倍体植株的叶长、叶宽、叶厚均高于二倍体植株,茎段增粗,叶色浓绿、气孔变大和密度下降、保卫细胞中叶绿体数目增加。  5.染色体数目鉴定及生理指标测定:经细胞染色体计数,加倍后植株的染色体数为2n=4x=40,对照植株的染色体数为2n=2x=20;四倍体植株叶片的叶绿素含量、可溶性蛋白、可溶性糖含量均高于二倍体;生理指标比较结果显示,四倍体叶片中的主要抗氧化酶SOD、POD和CAT活性均高于二倍体,且MDA含量积累少与二倍体。因此,与二倍体植株相比,四倍体植株的抗逆性可能更强。
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