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目的:为深入研究丝素蛋白在修复大鼠皮肤缺损过程中的作用机理,用免疫组织化学方法分别检测CD90、TGF-βl、α-SMA、I、Ⅲ型胶原在天蚕丝素材料、家蚕丝素材料和海绵材料修复大鼠皮肤缺损过程中的表达水平,探讨材料对主要修复细胞的影响,分析成纤维细胞CD90表达及其增殖、合成、收缩等功能的相关性。方法:1、雄性SD清洁级大鼠144只,随机分为3组。A组为天蚕丝素材料组,n=48;B组为家蚕丝素材料组,n=48;C组为海绵材料组,n=48;应用3组材料复合大鼠自体刃厚皮片修复大鼠背部皮肤缺损(2cm×2cm)。分别在术后5d、10d、15d和25d各组取材,标本固定,石蜡包埋,组织切片,HE染色。2、根据HE染色结果确定取材部位,每个组织蜡块中选取1个采样点,不同时间点分别构建4块组织芯片蜡块,阵列均为6×6。每块芯片包含同一时间点的36点组织标本。3、组织芯片行免疫组织化学染色,检测CD90、TGF-βl、α-SMA、I、Ⅲ型胶原在不同时间点各组材料修复大鼠皮肤缺损过程中的表达水平,将所得结果进行统计学分析。4、分析成纤维细胞CD90表达与TGF-βl、α-SMA、I、Ⅲ型胶原4种蛋白表达的相关性。结果:1、移植术后A、B两组复合皮片生长良好、全部存活;C组移植皮片大部分变黑、结痂,并有脱落。2、成功构建丝素蛋白材料修复大鼠皮肤缺损实验的组织芯片,用于免疫组化染色。3、免疫组织化学染色显示术后第10d、15d时A、B两组CD90阳性成纤维细胞表达较多,25d时有所下降,A、B两组相比无显著意义(P>0.05);与C组相比较差异均有显著意义(P<0.05)。4、TGF-βl和α-SMA在A、B两组中术后5d少量表达,而在第10d、15d时TGF-βl、α-SMA均有较高程度表达,25d时表达降低,两者相比无显著意义(P>0.05),两者与C组相比较均有非常显著意义(P<0.05)。5、术后25d时A、B两组中I、Ⅲ胶原表达较多,两者比较均无显著意义(P>0.05),与C组比较有显著意义(P<0.05)。6、统计学分析发现A、B两组中成纤维细胞CD90表达和TGF-βl、α-SMA表达具有相关性。结论: 1、天蚕丝素和家蚕丝素作为真皮支架材料没有明显差别,移植后局部炎性反应均较轻,具有良好的组织相容性,都可用作真皮缺损的修复材料。2、组织芯片具有效率高、质控好的优点,适合多因素比较研究,可用于修复大鼠真皮缺损的相关实验研究。3、丝素蛋白支架材料作为真皮模板早期能诱导创面周围和基底的成纤维细胞长入,后期可使CD90阳性成纤维细胞降低,可能减少成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,减轻瘢痕挛缩。4、实验结果提示在丝素蛋白支架材料修复大鼠真皮缺损中成纤维细胞CD90表达和TGF-βl、α-SMA表达具有相关性,三者之间可能存在一定的协同关系。