前言肿瘤的形成与发展是一个多基因、多步骤、多阶段的病理过程,胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一。是预后非常差的恶性肿瘤。胰腺癌的解剖部位以及早期缺少特异的症状使得早期诊断很困难,胰腺癌在早期阶段就能入侵周围组织和转移,并对化疗,放疗等常规治疗效果不佳。外科手术切除成为了可能治愈该疾病的唯一机会,但是目前外科手术仅限于疾病的早期阶段,大多数病人在手术后会出现复发,远处转移并在短期内死亡。研究胰腺癌浸润和转移的机制已成为目前研究的热点。而整合素连接激酶(Integrin—Linked Kinase,ILK)作为一种丝/苏氨酸蛋白激酶是多种致瘤相关因素的上游交叉点,在细胞与细胞外基质(ECM)的粘连中起到分子支架的作用,同时还参与了多种信号传导途径。在细胞粘附、信号传导、细胞周期等多方面影响肿瘤的形成、增殖、侵袭和转移,从而成为近年来的一个研究热点。ILK在正常组织中表达有限,但在人类神经源性肿瘤、胃癌、前列腺癌、卵巢肿瘤、黑色素瘤、结肠癌,肺癌中整合素链接激酶(ILK)表达明显增高且表达量与肿瘤的恶性程度及转移显著相关。目前,关于整合素链接激酶(ILK)与胰腺癌相关性的研究国内外还少有报导,为此,本实验运用免疫组织化学S-P法和Western blot法,结合完整的临床资料,对胰腺癌及其胰腺正常组织中整合素链接激酶(ILK)的表达情况进行研究,并分析整合素链接激酶(ILK)与临床病理因素的关系,以探讨它在胰腺癌中的表达及意义。材料与方法一、材料60例胰腺癌及32例正常胰腺组织均来自中国医科大学附属第一医院1990～2008年手术切除存档蜡块。组织均经10%甲醛固定,常规石蜡包埋。10例胰腺癌及其正常组织来自中国医科大学附属第一临床医院普外科2007年5月～2008年9月手术切除标本。二、方法(一)免疫组织化学染色:检测ILK表达采用链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化法(S-P法)。结果判定:ILK蛋白表达定位于细胞浆,光镜下每张切片选择3个高倍视野,每高倍视野计数100个瘤细胞,由3名病理医师独立计数。细胞浆和细胞膜中染色黄色或淡黄色为阳性,显微镜下观察细胞染色比率,染色比率大于30%为阳性(二)Western b1ot:检测ILK在正常胰腺组织和胰腺癌中的表达。取新鲜样品(1—2克)加5倍裂解缓冲液,剪碎、匀浆超声处理,高速低温离心提取上清蛋白,电泳,转印,经封闭后加相应的一抗、二抗及显色试剂检测。结果判定为转印膜上出现清晰的蓝紫色条带为阳性,实验结果用FluorChemV2.0 Stand Alone电泳凝胶分析软件测定灰度值作为定量指标,来判断ILK蛋白相对含量。三、统计学分析采用SPSS for windows 10.0软件,对IIK表达与临床病理特征的关系采用x~2检验。将蛋白印迹结果的灰度值分为胰腺癌组和正常组进行配对t检验。P<0.05有显著意义。结果一.ILK在正常胰腺组织和胰腺癌组织中的表达在正常的胰腺组织中ILK呈阴性表达,在胰腺癌组织中ILK呈阳性表达.Western Blot结果显示:ILK在胰腺癌和正常组织中有不同程度的表达,在胰腺癌组织中的表达明显高于相应的胰腺正常组织。二.ILK的表达与胰腺癌的临床病理因素的关系胰腺癌中,ILK阳性率为65%(39/60),其表达与肿瘤的临床分期(P<0.05)和淋巴结转移(P<0.05)相关,与分化程度无关(P>0.05)。结论一.ILK在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织。二.胰腺癌中,ILK表达与肿瘤的临床分期和淋巴结转移相关,与分化程度无关。