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目的:初步探讨癌基因Bmi-1的siRNA调控效应及下游靶基因。方法:针对Bmi-1 mRNA编码区设计3条siRNA,采用体外化学合成Bmi-1 siRNA,经LipofectamineTM2000脂质体分别转染具有完整Bmi-1-INK4a基因调控通路的K562细胞和缺失INK4a基因的A549细胞,荧光显微镜观察检测转染效率,MTT法检测Bmi-1 siRNA转染后2种细胞的增殖情况,计算有效Bmi-1 siRNA作用下2种细胞的IC50,流式细胞仪检测细胞周期分布,RT-PCR半定量检测Bmi-1 mRNA表达,Western Blot检测Bmi-1、P16和hTERT蛋白表达。结果:(1)转染6h后,荧光检测提示2种细胞中转染效率高达85%;(2)在设计的3条siRNA中,仅Bmi-1 siRNA1对2种细胞增殖的抑制作用呈较好的浓度依赖性,但无细胞特异性;(3) Bmi-1 siRNA1作用于A549和K562细胞的IC50分别为83.69 nmol/l和87.69 nmol/l;(4)转染Bmi-1 siRNA1后K562细胞中G1期比例明显增加而A549细胞中G1期比例变化不明显;(5)转染Bmi-1 siRNA1后2种细胞倍增时间均显著延长;(6)转染24h时,A549和K562细胞中Bmi-1 mRNA表达明显减弱,抑制效率分别为53.88%和58.94%;(7)转染48h时,A549和K562细胞中Bmi-1蛋白表达均明显降低,抑制效率分别达到68.86%和70.24%;(8) Bmi-1 siRNA1通过上调P16蛋白表达抑制K562细胞体外增殖;(9)在A549细胞中Bmi-1 siRNA1可下调hTERT蛋白表达。结论:(1) LipofectamineTM2000脂质体介导Bmi-1 siRNA转染A549和K562细胞具有转染效率高、方法简便等优点;(2)Bmi-1 siRNA1能显著抑制A549和K562细胞体外增殖,但无细胞特异性;(3)Bmi-1 siRNA1可有效抑制A549和K562细胞中Bmi-1基因表达;(4)Bmi-1 siRNA1显著阻滞K562细胞周期进程而在A549细胞中不明显;(5)在K562细胞中存在Bmi-1-INK4a基因调控通路;(6)在缺失INK4a基因的A549细胞中可能存在Bmi-1-hTERT基因调控通路。