研究背景：牙周炎是由牙菌斑微生物引起的感染性疾病,可导致牙龈炎症、牙周袋形成、进行性牙周附着丧失和牙槽骨破坏。虽然牙菌斑是牙周炎发病的始动因子,但是单从菌斑微生物角度不足以解释疾病严重程度的差异。越来越多证据表明某些危险因素(如系统性疾病和遗传因素)并不直接导致牙周炎的发生,而是影响其严重程度。已有研究表明,糖尿病患者患牙周炎的风险明显高于健康人。糖尿病是一种多病因的代谢性疾病,其中2型糖尿病是主要类型,临床上多见于35-40岁以后,占所有糖尿病的90%-95%。长期以来,胰岛功能损伤和胰岛素抵抗一直被认为是2型糖尿病发病的两个关键因素,但近年来的研究认为2型糖尿病是机体天然免疫系统启动的细胞因子介导的炎症反应,炎症在2型糖尿病的发病机制中起媒介作用。目前研究已证实炎症在胰岛素抵抗和胰岛β细胞损伤的发生过程中起重要作用；而炎症在牙周炎进展中的作用已得到充分肯定。C反应蛋白(CRP)是临床上广泛使用的炎症标志物之一,它已被证实与牙周炎和糖尿病的发生发展有关。研究表明：牙周炎可引起血清CRP浓度升高,其严重程度与血清CRP浓度呈正相关；CRP又是2型糖尿病的重要预测因子。血清CRP水平升高是牙周炎和糖尿病的共性反应,它为探究二者内在联系开启了新的领域。那么CRP是牙周炎影响全身健康的“交通使者”呢?还是仅仅在糖尿病性牙周炎的发生发展中作为炎症反应标志物而存在呢?C反应蛋白是一种急性时相蛋白,在细胞因子IL-Iβ、IL-6、TNF-α、干扰素、转化生长因子β(TGF-β)等诱导下主要由肝脏细胞合成,外周血淋巴细胞也可少量产生。在组织受到损伤、感染或肿瘤破坏时,血清CRP浓度可以在数小时内急剧上升,病情改善后可逐渐下降,至恢复正常。它可增强白细胞反应性、补体的固定及炎症部位细胞碎片的清除,具有免疫识别特性及免疫调节功能,是亚临床系统感染的一项敏感性指标。研究发现遗传和环境因素共同影响CRP水平,其中遗传因素可解释个体间CRP水平差异的35%-40%。多群体的大样本研究表明CRP基因多态性与其血清基线水平显著相关。目前,已发现将近40种CRP单核苷酸多态性,部分SNPs或其单倍型已被证实与血浆CRP水平有相关性。而CRP基因多态性与系统性疾病的相关研究中涉及较多的是其与心血管类疾病间的相关关系。C反应蛋白基因多态性与糖尿病和牙周炎的研究相对匮乏。本研究通过检测CRP和HbA1c基线水平及CRP基因多态性的分布,探讨CRP基因多态性与2型糖尿病伴慢性牙周炎人群血清CRP和HbA1c基线水平的相关性；通过分析CRP SNPs与牙周基础治疗前后该人群CRP与HbA1c水平的纵向改变的相关性,探讨不同遗传背景的牙周炎患者对牙周基础治疗的反应性与敏感性差异。第一章在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中C反应蛋白基因多态性与血清C反应蛋白基线水平的相关性研究目的：检测中国广州汉族2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中血清CRP水平及CRP基因多态性的分布；探讨CRP基因多态性与该人群血清CRP基线水平的相关性。方法：本章共纳入135名受试者,均来自广州市三级甲等医院门诊在2008年9月至2009年9月期间的门诊病人。纳入标准：①糖尿病确诊1年以上,糖尿病病情稳定,用药2个月内无变化,无严重并发症；②患有慢性牙周炎,全口存留≥16颗牙齿,且未经过系统牙周治疗,1年内未接受过洁治。排除标准：①患有影响牙周健康的其他系统性疾病,如冠心病等；②除牙周炎外,身体其他部位存在活动性炎症；③调查前4周内服用抗生素；④妊娠期、哺乳期或治疗期间计划怀孕；⑤拒绝参加本研究。所有受试者于早晨8-10点间采集空腹静脉血,检测血清高敏C反应蛋白(hsCRP)浓度。采用基因组DNA试剂盒提取所有受试者的外周血DNA。采用直接测序法和多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法测定C反应蛋白CRP-757 T >C,-717 A>G,-409 G>A,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444 C>T位点的基因型,检测2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中CRP各基因型。采用KruskalWallis检验和Mann-Whitney检验分析CRP各位点不同基因型间CRP浓度的差异。如果有差异,则根据hsCRP的中位数,把研究对象分为两组,通过x2检验分析两组间等位基因频率的差异。结果：1.CRP SNPs Hardy-Weinberg平衡检验CRP -757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444 C>T各位点基因型频率在本研究人群中分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)2.CRP基因型及等位基因在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中的分布CRP各位点主要基因型：-757 T>C的TT基因型；-717 A>G的AA基因型；-286 C>A>T的CC基因型；+1059 G>C的GG基因型；+1444 C>T的CC基因型。-409 G>A位点只检测到GG一种基因型；+1059 G>C未发现CC基因型。3.CRP基因各位点间的连锁不平衡分析在本研究2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中-286 C>A>T和-757 T>C存在较强的连锁不平衡(r2=0.648)。4.CRP基因各位点间的单倍型分析本研究中发现5种有效单倍型(CAAGC, TACCC, TACGC, TATGT和TGCGC)其中TACGC(占51.0%)是主要的单倍型。5.CRP基因多态性与血清CRP基线水平的相关性CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T这三种多态性不同基因型间的血清CRP浓度的差异有统计学意义；其余两基因多态性+1059 G>C和+1444 C>T不同基因间的血清CRP浓度的差异有统计学意义(P>0.05)高浓度hsCRP (>50%)组-757 T>C C等位基因,-717 A>G的A等位基因和-286 C>A>T的A等位基因的携带率显著高于低浓度hsCRP组。第二章在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中C反应蛋白基因多态性与HbA1c基线水平相关性的研究目的：探讨中国广州汉族2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中C反应蛋白基因多态性与HbA1c基线水平的相关性。方法：研究对象、CRP基因型的检测同第一章。所有受试者检测HbA1c水平。采用Kruskal Wallis检验和Mann-Whitney检验分析CRP各位点不同基因型间HbA1c基线水平的差异。结果：本研究中CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444C>T不同基因型间HbA1C基线水平的差异无统计学意义(P>0.05)。第三章在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中C反应蛋白基因多态性与牙周基础治疗后血清CRP水平变化的相关性研究目的：初步探讨中国广州汉族人群2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中CRP基因多态性与牙周基础治疗后hsCRP水平变化的相关性。方法：本章纳入90例患者在基线时接受牙周非手术治疗,包括口腔卫生宣教(OHI)、全口洁刮治、根面平整、调牙合、拔除无法保留的患牙；在3个月和6个月时行牙周维护治疗,包括口腔卫生宣教及常规龈上下洁刮治。6个月复诊时再次检测血清hsCRP水平。CRP基因型分析同第一章。采用Kruskal Wallis检验和Mann-Whitney检验分析CRP各位点不同基因型与牙周基础治疗前后hsCRP水平变化的差异。结果：本研究中CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444C>T不同基因型间hsCRP水平变化的差异无统计学意义(P>0.05)。第四章在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中C反应蛋白基因多态性与牙周基础后疗后HbA1c水平变化的相关性研究目的：初步探讨中国广州汉族人群2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中CRP基因多态性与牙周基础治疗后HbA1c水平变化的相关性。方法：CRP基因型的检测及牙周非手术治疗同第一章。6个月复诊时再次检测HbA1c血清水平。采用Kruskal Wallis检验和Mann-Whitney检验分析CRP各位点不同基因型与牙周基础治疗前后HbA1c水平变化的差异。结果：本研究中CRP+1444 C>T位点不同基因型间HbA1c水平变化的差异有统计学意义,TT+TC基因型携带者的HbA1c水平的变化较大。-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T和+1059 G>C位点不同基因型间HbA1c水平变化的差异无统计学意义(P>0.05)。全文总结：1、中国汉族2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T多态性与血清CRP基线水平相关；-757 T>C C等位基因,-717 A>G的A等位基因,-286 C>A>T的A等位基因与高水平CRP相关。2、2型糖尿病伴慢性牙周炎患者CRP+1444 C>T位点多态性与牙周基础治疗后HbA1c水平的变化有关,TC+TT基因型携带者对牙周基础治疗反应较敏感。3、尚不能认为2型糖尿病伴慢性牙周炎患者CRP+1059 G>C,+1444 C>T位点多态性与血清CRP基线水平有关。4、尚不能认为2型糖尿病伴慢性牙周炎患者CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444 C>T位点多态性与HbA1c基线水平有关。5、尚不能认为2型糖尿病伴慢性牙周炎患者CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444 C>T位点多态性与牙周基础治疗后CRP水平的变化相关。6、尚不能认为牙周基础治疗前后2型糖尿病伴慢性牙周炎患者牙周CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T和+1059 G>C位点多态性HbA1c水平的变化相关。7、中国人群的CRP-286 C>A>T和+1444 C>T位点与日本人具有相同的遗传背景；与欧美健康人群具有不同的遗传背景。