【摘 要】
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本论文在小分子簇水环境下培养微生物Absidia sp.R9g菌,通过研究该微生物产芦丁-α-鼠李糖苷酶即RhaR的酶活力影响情况,来分析小分子簇水对微生物生长的影响,结果表明在小分
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本论文在小分子簇水环境下培养微生物Absidia sp.R9g菌,通过研究该微生物产芦丁-α-鼠李糖苷酶即RhaR的酶活力影响情况,来分析小分子簇水对微生物生长的影响,结果表明在小分子簇水环境下培养的微生物,产出的RhaR对环境的适应能力变强,对酸碱和温度的耐性有明显提高,并且粗酶在碱性环境下,仍有较好的酶活性。且本论文实验底物芦丁具有随pH增加溶解度增大的特点,该酶性质的改善,可使芦丁在更高溶解度的条件下被酶催化水解生成异槲皮苷。首先,用硫酸将不同pH值溶解的芦丁进行酸水解反应,因为酸水解彻底,所以可以确定还原糖的量和芦丁水解的量成正比,用DNS法测定还原糖的量以显示芦丁在碱性环境下的溶解度远大于在中性环境。然后利用簇水发酵培养,筛选能够产较好活性的芦丁-α-鼠李糖苷酶的微生物,并对其培养条件进行优化,确定以Absidiasp.R9g为最佳菌种,槐花为诱导物,浓度为2.5%,一般在30℃下培养5-6d。其次,将粗酶液提取后,进行反应条件的优化,确定该粗酶的最适反应条件:最适酶反应温度为50℃,最适pH值为10,最佳底物浓度为1.5%,最佳反应时间为14h。最后,利用DEAE-CelluloseDE52阴离子交换柱对该酶进行了分离纯化,并对其酶性质进行研究,确定纯酶的最适pH为6.0,在pH值3到10内稳定,最适反应温度为60℃,稳定性为20-60℃,用SDS-PAGE方法确定纯酶的分子量和纯度。确定其分子量为 67.5kDa。
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