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研究背景动脉粥样硬化性心血管疾病的本质是慢性炎症性疾病。研究发现,许多炎性细胞因子和粘附分子会加速动脉粥样硬化的发生发展,而一些细胞因子可以直接参与调节细胞内胆固醇的代谢,在动脉粥样硬化发生发展过程中起着促进或者抑制的作用。半乳糖凝聚素-3（galectin-3,Gal-3）主要由活化的巨噬细胞分泌,它是脊椎动物凝集素家族中唯一独特的类似嵌合体结构的凝集素。既往研究发现,半乳糖凝集素3是一种多功能糖蛋白,参与人体诸多病理和生理过程,尤其是纤维化过程。近年来有研究显示,Gal-3与冠心病关系密切,但Gal-3与冠心病的发生、粥样斑块的稳定性、复杂程度及是否能作为冠心病患者评估预后的有价值的预测因子尚缺乏系统的报道。作为一种炎症因子,Gal-3是否直接参与了调节细胞内胆固醇代谢也罕有报道。最新有研究显示,Gal-3可以促趋化因子CCL2的表达。而另外的研究显示,CCL2通过结合CCR2,可以激活p38/Mitogen-activated Protein Kinase（p38/MAPK）途径,抑制胆固醇的流出（Cholesterol Efflux）,而P38/MAPK信号途径可以通过调节PPAR-γ和LXR-a的表达,影响胆固醇的流出。综上,我们推测,Gal-3可能与冠心病的发生、进展及冠脉复杂程度密切相关。而且,它还可能直接参加了调巨噬细胞胆固醇代谢的活动,其机制可能为Gal-3促进CCL2的表达,激活p38/MAPK途径,从而抑制PPAR-γ和LXR-a的表达,减少细胞内胆固醇的流出,导致细胞内胆固醇蓄积,泡沫细胞形成,而促进动脉粥样硬化的发生。研究目的评估Gal-3与冠心病发生、冠脉狭窄程度及其对冠心病预后的预测价值。探索Gal-3调节巨噬细胞胆固醇代谢的可能机制。研究方法1.在体内水平,以2018年1月至12月在中山市人民医院心内科就诊,诊断分别为ST段抬高心肌梗死（STEMI）,非ST段抬高急性冠脉综合征（NST-ACS）、稳定性心绞痛（SAP）、冠脉造影阴性患者为研究对象,留取血样检测患者外周血清Gal-3的表达,评估Gal-3与冠心病发生、冠脉狭窄程度及其对冠心病预后的预测价值。2.体外水平研究以RAW264.7小鼠巨噬细胞为对象,评估Gal-3对RAW264.7小鼠巨噬细胞细胞内胆固醇浓度及胆固醇流出率的影响;同时测定Gal-3干预下,CCL2及P38/MAPK的表达及胆固醇代谢相关蛋白表达,探索Gal-3调节胆固醇代谢的可能机制。首先Gal-3以不同浓度梯度和作用时间刺激RAW264.7细胞建立模型,以Western Blotting、高效液相、3H胆固醇检测等实验方法,探索Gal-3对RAW264.7细胞胆固醇转出率,细胞内胆固醇浓度以及与胆固醇转运相关基因和蛋白的表达的影响。然后测定在Gal-3刺激下,CCL2及P38/MAPK的表达。最后分别引入CCL2及P38/MAPK抑制剂,测定Gal-3刺激下,RAW264.7细胞内胆固醇浓度、细胞胆固醇转出率的变化;同时测定引入抑制剂后,在Gal-3干预下,CCL2及p38/MAPK蛋白及mRNA表达的差异,以及与巨噬细胞内胆固醇转运相关蛋白如PPAR-γ、LXR-a、ABCA1、ABCG1表达的差异。研究结果本研究发现结果总结如下:1.与非冠心病患者相比,冠心病患者血清Gal-3水平明显升高。2.非ST段抬高急性冠脉综合征（NST-ACS）患者血清Gal-3水平高于稳定性心绞痛患者（SAP）和非冠心病患者,ST段抬高心肌梗死患者Gal-3水平高于NST-ACS患者。血清Gal-3水平是急性冠脉综合征发生的独立危险因素。3.在所有冠心病组患者中,血清Gal-3水平与Syntax评分（Syntax Score,SS）正相关,高SS组Gal-3表达升高,血清Gal-3也是SS的独立预测因素。4.在急性冠脉综合征患者中,相比较低Gal-3表达水平组（＜4.78ng/ml）,较高血清Gal-3水平（≥4.78ng/ml）1年主要心脏不良事件（MACEs）发生率增高。5.Gal-3刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞,细胞胆固醇转出率下降,细胞内胆固醇浓度升高,同时伴随PPAR-γ和LXR-a表达下调,ABCA1及ABCG1表达下降。6.Gal-3刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞,CCL-2及p38/MAPK表达上调。使用抑制剂抑制CCL-2或者P38/MAPK后,可以减弱Gal-3对细胞内胆固醇转运的抑制,恢复巨噬细胞胆固醇转出率。7.以Bindarit抑制CCL2后,可以解除Gal-3对P38/MAPK表达的影响,同时可以减弱Gal-3对LXR-a和PPAR-γ及其下游ABCA1和ABCG1表达的抑制。8.以SB203580抑制P38/MAPK通路后,Gal-3依然可以上调CCL2的表达,但其抑制LXR-a和PPAR-γ及其下游ABCA1和ABCG1表达的作用减弱。研究结论本研究证实,Gal-3与冠心病密切相关,且在冠心病发生,冠脉狭窄程度及预测急性冠脉综合征患者1年MACEs事件发生有重要价值。Gal-3可能通过促进趋化因子CCL2表达,激活P38/MAPK信号通路,抑制LXR-a和PPAR-γ的表达,以及下游ABCA1和ABCG1的表达,引起巨噬细胞胆固醇流出率下降,导致细胞内胆固醇浓度升高,从而参与动脉粥样硬化的发生发展。