【摘 要】
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目的本文通过研究多房棘球蚴对巨噬细胞线粒体功能的影响,探索泡型棘球蚴病的发病机制,为疾病的防治提供新的思路。方法将小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）分为对照组、共培养组（巨噬细胞与多房棘球蚴原头节比例为500∶1）,培养24h、48h、72h。通过倒置相差显微镜观察巨噬细胞及多房棘球蚴原头节状态;采用50ng/m L Mito Tracker （?） Deep Red FM线粒体荧光探针标记巨噬
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目的本文通过研究多房棘球蚴对巨噬细胞线粒体功能的影响,探索泡型棘球蚴病的发病机制,为疾病的防治提供新的思路。方法将小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）分为对照组、共培养组（巨噬细胞与多房棘球蚴原头节比例为500∶1）,培养24h、48h、72h。通过倒置相差显微镜观察巨噬细胞及多房棘球蚴原头节状态;采用50ng/m L Mito Tracker （?） Deep Red FM线粒体荧光探针标记巨噬细胞线粒体并通过Cytation5细胞成像微孔板检测系统检测线粒体平均荧光强度;通过q PCR检测线粒体DNA拷贝数及线粒体转录因子A的表达水平;利用细胞能量代谢仪检测线粒体功能;采用流式细胞术检测线粒体活性氧及线粒体膜电位水平。采用50ng/m L Mito Tracker （?） Deep Red FM和100ng/m L Lysosomal Staining Reagent-Blue-Cytopainter对巨噬细胞线粒体及溶酶体进行荧光标记并通过Cytation5细胞成像微孔板检测系统检测线粒体和溶酶体的共定位情况;利用细胞免疫荧光技术分析巨噬细胞线粒体自噬相关蛋白LC3B与TIM23共定位情况;通过Western blot检测LC3B及TIM23的蛋白表达水平。结果巨噬细胞与多房棘球蚴原头节共培养后,与对照组相比,共培养组巨噬细胞线粒体平均荧光强度、线粒体DNA拷贝数及线粒体转录因子A的表达水平均降低（P＜0.05）;共培养组巨噬细胞线粒体活性氧平均荧光强度和线粒体膜电位降低的细胞数目百分比均升高（P＜0.001）;共培养组巨噬细胞基础耗氧率、最大呼吸能力及非线粒体呼吸耗氧量升高,但巨噬细胞ATP生成量及备用呼吸能力百分比均降低（P＜0.05）;共培养组线粒体与溶酶体共定位及LC3B与TIM23共定位的巨噬细胞增多;共培养组巨噬细胞LC3B蛋白表达水平升高,TIM23蛋白表达水平随着共培养时间延长均降低（P＜0.05）。结论多房棘球蚴导致巨噬细胞线粒体数目降低,抑制线粒体转录因子A的表达,降低线粒体膜电位,影响线粒体代谢功能,并引起巨噬细胞发生线粒体自噬
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