论文部分内容阅读
目的：本实验拟通过建立大鼠脑出血模型，并予以神经节苷酯干预，检测大鼠脑出血后血肿周围组织内细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白Fas、FasL、Bax、Bcl-2的表达变化，以探讨神经节苷酯对脑细胞凋亡的影响。方法：1.实验分组：雄性SD大鼠48只体重均为250～300克，采用随机数字法将其分为3组：假手术组（n=8），脑出血组（ICH组）（n=20），脑出血+神经节苷酯治疗组(GM1组)（n=20）,每组按处死时间点不同分为6h，24h，3d，7d四个亚组。2.大鼠脑出血模型制备：运用脑立体定位仪制备自体全血注入法大鼠脑出血模型。ICH组和GM1组采用断尾取血，全血颅内注入法制作脑出血模型，假手术组只进针不注血。3.模型成功评价。4.药物干预：GM1组在术后即刻以神经节苷酯30mg/kg注入大鼠腹腔，ICH组以及假手术组用等量生理盐水代替。5.神经功能障碍评分：采用Garcia评分方法进行评分,最低3分，最高18分，分数越高则神经功能损害越轻，分数越低则神经功能损害越重。6.标本提取及检测：各组大鼠在指定时间点处死，断头取脑，制作脑组织切片。采用原位末端标记法（TUNEL法）检测细胞凋亡，免疫组化法检测凋亡相关蛋白Bax，Bcl-2，Fas，FasL表达情况，进行分析并测定其平均积分光密度（AIOD值）。7.统计分析：采用方差分析和Person直线相关分析。结果：1. GM1组术后神经功能障碍较脑出血组轻（P＜0.05）。2.TUNEL染色显示：ICH组和GM1组细胞凋亡较假手术组明显（P＜0.05）；GM1组细胞凋亡较ICH组减轻（P＜0.05）。3.免疫组化显示：GM1组各个时间点促凋亡蛋白Bax、Fas、FasL的表达量均低于ICH组（P＜0.05），抑凋亡蛋白Bcl-2的表达量均高于ICH组（P＜0.05）。4.直线相关性分析：Bax蛋白表达与脑细胞凋亡呈正相关（r=0.821，P＜0.01）；Bcl-2蛋白表达与脑细胞凋亡呈负相关（r=-0.666，P＜0.01）；Fas蛋白表达与脑细胞凋亡呈正相关（r=0.415，P＜0.01）；FasL蛋白表达与脑细胞凋亡呈正相关（r=0.775，P＜0.01）。结论：1.细胞凋亡机制参与了脑出血后继发性脑损伤。2.神经节苷酯对大鼠脑出血有明显的神经保护作用，其机制可能是通过上调抑凋亡蛋白，下调促凋亡蛋白的表达来实现的。