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植物内生真菌具有丰富的生物多样性,与宿主之间存在着互利共生的协同进化关系,能产生与宿主相同或者相似的次级代谢产物。从内生真菌的次级代谢产物中发掘活性优良的天然产物成为目前的研究热点。本论文以湖北恩施州烟草为研究对象,通过组织分离法,探究不同生育时期、不同组织部位、不同海拔高度的内生真菌多样性和种群结构,并采用CCK-8（Cell Counting Kit-8）法,从获得的内生真菌中筛选具有抗肿瘤活性的功能菌株,然后对功能菌株进行规模发酵,从其次级代谢产物中分离纯化具有抗肿瘤活性的单体化合物。主要试验结果如下:1.从不同组织部位、不同生长时期、不同海拔样地的健康烟株中分离到539株内生真菌,鉴定为31属73种,Shannon多样性指数为2.78。其中,Aspergillus和Fusarium为优势菌群,其相对分离频率分别为22.63%和12.99%;常见内生真菌13属,稀有内生真菌16属。不同组织、不同生育期、不同海拔中内生真菌的多样性差异主要体现在稀有属上。2.根部分离到内生真菌19个属,茎部分离到24个属,叶部分离到18个属,茎部内生真菌的多样性高于叶部和根部,且根部出现6个特有属,茎部出现5个特有属,叶部仅出现1个特有属,表现出组织专化性。3.苗期分离到内生真菌8个属,团棵期15个属,旺长期21个属,成熟期23个属,内生真菌多样性随着生育期的延长呈上升趋势。且团棵期出现1个特有属,旺长期出现4个,成熟期出现9个,表现出生长专化性。4.600 m海拔处分离到内生真菌30个属,1000 m海拔处分离到28个属,1300 m海拔处分离到22个属,内生真菌的多样性随着海拔的升高呈递减的趋势。其中,600 m海拔处出现2个特有属,1000 m海拔处出现1个特有属,表现出海拔专化性。5.20株烟草内生真菌的发酵液粗提物对人肾癌Caki-1细胞、人肝癌HepG2细胞均具有一定的抑制活性,尤其是对于人肾癌Caki-1细胞,菌株TE-1S、TE-6L、TE-14L的PDB发酵粗提物,TE-6L、TE-8L、TE-20R的大米发酵粗提物在48 h内的IC50<40μg/mL。筛选到一株具有潜在应用价值的菌株F.sambucinum,其PDB发酵液及大米发酵物对人肾癌Caki-1细胞48 h内IC50分别为13.28μg/mL和0.36μg/mL。6.从菌株F.sambucinum的次级代谢产物中共分离到9个单体化合物,化合物1,7和9对人肾癌Caki-1细胞具有增殖抑制活性,其24 h和48 h的IC50值分别为18.24、3.32μg/mL,10.97、1.91μg/mL和7.81、0.83μg/mL。其中,化合物9表现出较强的活性,该化合物为麦角甾醇5,8过氧化物,是一类较少见的甾醇。