论文部分内容阅读
目的：我国成年人糖尿病的患病率快速增加，从2007年的9.7％到2010年增长至11.6%，糖尿病及其多种并发症严重危害了人民的健康。2型糖尿病的发病机制复杂，传统观念认为它属于代谢性疾病的范畴，而现代研究认为它也是一种慢性系统性炎症反应。慢性系统炎症的过程中伴随着单核巨噬细胞系统的极化，主要的极化形式为促炎型 M1型和抗炎型M2型。2010年日本的Satoh等发现肥胖的2型糖尿病患者外周血单核巨噬细胞系统存在极化失衡，促炎型M1型细胞的表面标志物表达水平增高，而抗炎型M2型细胞表面标志物表达水平降低。所以本研究推测单核巨噬细胞系统极化失衡参与了2型糖尿病的发病，通过流式细胞术分析2型糖尿病患者外周血单核细胞M1/M2型的极化状态，旨在探讨单核巨噬细胞系统极化失衡与2型糖尿病及其并发症的关系。 方法：⑴采用横断面研究方法，随机选取天津医科大学代谢病医院住院的2型糖尿病人108例，天津医科大学总医院空港国际医院体检中心正常对照50例。收集入选对象的一般情况、生化指标及影像学检查结果。⑵清晨空腹留取受试者肘静脉血，采用流式细胞仪检测受试者外周血中单核细胞M1型和M2型的比例，其中M1型细胞标记抗体为CD68（白细胞分化抗原68）和CCR2（趋化因子-C受体-2），而M2型细胞则采用CD163和CX3CR1（趋化因子-X3C受体-1）2种抗体进行标记。并且计算M1/M2型比值，采用两样本独立t检验的方法比较2型糖尿病患者和对照组外周血中单核细胞M1型和M2型的比例以及M1/M2型比值的差异。并且根据2型糖尿病并发症的有无分成若干亚组，探讨单核巨噬细胞系统极化失衡与并发症的关系。⑶使用单个核细胞分离液提取2型糖尿病患者和正常人外周血的原代单个核细胞进行培养，37℃、5%CO2孵箱中培养24小时，待细胞状态稳定后进行干预实验，共分成4组：健康对照组（健康人单个核细胞）、病例对照组（T2DM单个核细胞）、健康干预组（健康人单个核细胞+0.1mg/L LPS）和病例干预组（T2DM单个核细胞+0.1mg/L LPS），37℃、5%CO2孵箱中干预24h，然后进行流式细胞仪分析炎症刺激后的单核细胞M1/M2型极化状态的变化情况。 结果：①糖尿病组患者外周血M1型单核细胞比例和M1/M2型比值高于正常对照组，M2型细胞比例低于正常对照组（均P<0.05)。②大血管并发症组和大血管、微血管并发症并存组糖尿病患者外周血的M2型单核细胞比例低于单纯糖尿病组，而大血管、微血管并发症并存组M1/M2型比值高于正常对照组、微血管并发症组和大血管并发症组（均P<0.05）。③同时患有3种糖尿病大血管并发症的患者外周血中M1型单核细胞比例和M1/M2型比值均高于单纯糖尿病组、仅患有1种或2种大血管并发症组，而同时患有3种大血管并发症的患者M2型单核细胞比例低于单纯糖尿病组和仅患有1种大血管并发症组（均P<0.05）。其中，冠心病组M1型单核细胞比例和M1/M2型比值高于单纯糖尿病组，而M2型单核细胞比例低于单纯糖尿病组（均P<0.05）。脑血管病变组M2型单核细胞比例低于单纯糖尿病组，而M1/M2型比值高于单纯糖尿病组（均P<0.05）。下肢血管病变组外周血M2型单核细胞比例低于单纯糖尿病组，而M1/M2型比值高于单纯糖尿病组（均P<0.05）。④同时患有3种糖尿病微血管并发症的患者外周血中M1型单核细胞比例和M1/M2型比值均高于单纯糖尿病患者、仅患有1种或2种微血管并发症的糖尿病患者，而同时患有3种微血管并发症的M2型单核细胞比例低于单纯糖尿病患者、仅患有1种或2种微血管并发症组，但差异无统计学意义（均P>0.05）。其中，早期DN组和临床DN组M1型单核细胞比例高于DM组（均P<0.05）。DR组M1型单核细胞比例和M1/M2型比值高于单纯糖尿病组，而M2型单核细胞比例低于单纯糖尿病组，但差异无统计学意义（均P>0.05）。DPN组和单纯糖尿病组两组间 M1、M2型单核细胞比例和 M1/M2型比值没有明显差异（均P>0.05）。⑤病程≥10年组的糖尿病患者外周血M1型单核细胞比例和M1/M2型比值均高于病程<10年组，差异均具有统计学意义（均P<0.05）。而两组间M2型单核细胞比例无统计学差异（P>0.05）。⑥经过多重线性回归分析，结果显示 M1型单核细胞比例与舒张压、D-二聚体和hs-CRP相关，而 M2型单核细胞比例和M1/M2型比值仅与hs-CRP相关，具有统计学意义（均P<0.05)。⑦0.1mg/L的LPS干预24小时后通过流式细胞仪检测发现：健康对照和糖尿病患者的M1型单核细胞比例和M1/M2型比值均增高，而且糖尿病患者的增高幅度大于健康对照，而健康对照和糖尿病患者的M2型单核细胞比例均降低，而且糖尿病患者的降低幅度大于健康对照，差异具有统计学意义（均P<0.05）。 结论：⑴2型糖尿病患者存在单核巨噬细胞M1/M2型极化失衡，促炎型M1型细胞增多，而抗炎型M2型细胞减少。这种极化失衡在糖尿病大血管并发症和糖尿病肾病患者中比较明显著，病程长者更明显。⑵2型糖尿病患者体内的单核细胞具有前炎症状态，炎症反应更加强烈，而且单核巨噬细胞M1/M2型极化失衡与hs-CRP相关，提示炎症、单核巨噬细胞M1/M2型极化失衡和2型糖尿病三者间联系密切。