【摘 要】
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云南紫菀和臭蚤草是藏医传统习用药材,云南紫菀为菊科多年生草本植物云南紫菀Aster yunnanensis Franch.的干燥全草,生于高山及亚高山草甸,海拔2500~4 500 m,用于治流行性感冒、发烧、食物中毒、疮疔、癣症,清瘟病时疫热,解痉挛。臭蚤草为菊科植物臭蚤草Pulicaria insignis Drumm.ex Dunn的干燥全草,多年生草本植物,生于山脊岩石,石砾坡地和草丛中,
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(31870314); 国家重点研发计划课题(2019YFC1712503); 四川省科技厅区域创新合作项目(2020YFQ0007); 西南民族大学中央高校基本科研业务专项基金项目(2020PTJS26004)和(2021HQZZ01);
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云南紫菀和臭蚤草是藏医传统习用药材,云南紫菀为菊科多年生草本植物云南紫菀Aster yunnanensis Franch.的干燥全草,生于高山及亚高山草甸,海拔2500~4 500 m,用于治流行性感冒、发烧、食物中毒、疮疔、癣症,清瘟病时疫热,解痉挛。臭蚤草为菊科植物臭蚤草Pulicaria insignis Drumm.ex Dunn的干燥全草,多年生草本植物,生于山脊岩石,石砾坡地和草丛中,海拔2 800~4 310m,具有散肿止痛之功效,用于治热性炭疽、疔疮等。藏医药典籍《晶珠本草》记载:臭蚤草花蕊色黑状如紫菀,故可作为替代品。而《藏药晶镜本草》记载:云南紫菀和臭蚤草同属于“敏间”类,味苦治疔疮,具有较浓郁的特殊恶臭气味。这两种药材在藏区被广泛使用,它们形态相似,且都具有特殊的恶臭气味,因此,在藏民间,这两种植物常被混淆使用。然而,它们分属于菊科紫菀属和蚤草属,亲缘关系相差较远,国内外对其研究较少,现阶段对其物质基础研究薄弱,临床应用存在较大的安全隐患。本课题利用现代先进的分析技术,以期摸清云南紫菀和臭蚤草之间的内在联系与差异,为藏药材“敏间”的正本清源和临床安全应用提供科学依据。主要研究内容如下:(1)性状、组织特征。通过药材性状、显微特征由表及里对云南紫菀和臭蚤草进行鉴别。寻找原植物特征、药材性状等表观鉴别信息,再深入剖析根、茎、叶横切面组织及粉末的显微特征,同时进行薄层色谱鉴别。结果原植物形态、药材性状及根、茎、叶横切面特征存在较大差异,粉末显微特征相似;薄层色谱中均有清晰的绿原酸斑点。(2)代谢组学对比研究。通过GC-MS、UPLC-Q-TOF MS/MS代谢组学方法,从分子水平探究云南紫菀和臭蚤草的内在联系与差异。结果GC-MS非靶向代谢组学方法共鉴定出云南紫菀和臭蚤草中包括氨基酸及其衍生物、苯丙素类、芳香族、苷类、核苷酸、黄酮类、生物碱类、糖类、维生素、有机酸、脂类、酯类、醇类等在内的384种代谢产物,通过化学计量学分析筛选出92种差异代谢物,它们在含量上存在显著差异。UPLC-Q-TOF MS/MS代谢组学方法初步鉴定出云南紫菀中45种代谢物和臭蚤草中42种代谢物,基于系统聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA),12批云南紫菀和6批臭蚤草主要分为2大类,云南紫菀Y2、Y4、Y5、Y7、Y8为一大类,臭蚤草和其余批次云南紫菀聚为一大类,对云南紫菀分类差异进行解析,其中8种代谢物可作为云南紫菀产地鉴别的依据。(3)指纹图谱的建立及指标成分的质量控制。建立了云南紫菀和臭蚤草的UPLC指纹图谱,并对其进行相似度评价,在12批次云南紫菀中标定了21个共有峰,在6批次臭蚤草中标定了31个共有峰。相似度评价结果表明,云南紫菀和臭蚤草各批次间相似度良好。通过与对照品比对,指认了云南紫菀中11个主成分峰,分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、槲皮素、芹菜素、山奈酚;指认了臭蚤草中7个主成分峰,分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、芹菜素,并对其进行了含量测定。(4)抗氧化活性评价及谱效相关性分析。以云南紫菀和臭蚤草清除DPPH自由基和ABTS+自由基的能力以及FRAP总还原力来综合评价这两组植物的抗氧化活性,并以此为基础进行各批次样品的抗氧化活性测定,从化学成分的差异剖析样品抗氧化活性的种间差异。结果当样品浓度为0.1 mg/m L时,与Vc(0.01mg/m L)的抗氧化活性相当;相同浓度的样品抗氧化活性存在较大差异,其代谢物的差异及代谢物含量的差异可能是导致它们抗氧化活性差异的重要原因。并结合皮尔逊相关系数和灰色关联度分析得出:新绿原酸、绿原酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸酸C以及所测定的11种成分含量总和对云南紫菀抗氧化活性的贡献较大,可作为云南紫菀抗氧化活性评价的重要指标。但在臭蚤草中,所测定的成分与抗氧化活性没有表现出较显著的相关性,可能是因为这些成分在臭蚤草中含量积累还不够。(5)抑菌活性研究。考察云南紫菀和臭蚤草挥发油对近2-3年成都地区医院收集的临床分离致病甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)、大肠埃希菌(E-)、肺炎克雷伯菌(E-)、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性(MIC值)及抑菌圈,并与阳性对照左氧氟沙星进行比较。结果发现云南紫菀对鲍曼不动杆菌有较弱的抑菌活性,臭蚤草对铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌有较弱的抑菌活性,其代谢物的差异可能是导致他们对不同的临床致病菌起抑制作用的原因。
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