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前言 胰腺癌是消化系统较常见的恶性肿瘤，在全世界有逐渐增多的趋势，发病率最高为10／10万人口。从美国、欧洲、日本的统计资料看，预计今后仍有增加的倾向。胰腺癌早期诊断困难，临床病人多为进行期或晚期，但切除后的5年生存率不足5％，疗效不能令人满意，其原因主要为胰腺癌临近受浸润的脏器多，范围广，淋巴组织多、沿神经丛转移等多种因素，加以胰腺癌自身的生物学行为的特点，肿瘤对放疗、化疗不敏感而限制其应用是造成手术后远期生存率低的重要原因。目前，在胰腺癌的综合治疗中，对新的抗肿瘤药物的研究和探索仍是胰腺癌治疗的一个热点课题。 肿瘤分化诱导治疗是当今恶性肿瘤综合治疗的一种新策略，在过去的十五年里，大量文献报道：人体内绝大多数细胞，包括多种肿瘤细胞的细胞膜都存在一种维生素D受体（vitamin D receptor,VDR），它具有抑制肿瘤细胞的增殖和促进肿瘤细胞分化的作用，维生素D类物质的确切作用机制尚未完全明确，但发现其可以与VDR及其他相关受体结合来调节肿瘤细胞的生长与分化。EB1089是1991年合成的维生素D的一种衍生物，本身除了具有对肿瘤细胞的抗增殖和诱导分化的作用外，而且在体实验中对血液中钙浓度的影响是普通维生素D物质1α，25（OH）2 vitaminD3作用的50％，这使EB1089成为一个非常有潜力的抗肿瘤药物，国外许多机构及学者对它在各种肿瘤主要是乳腺癌、结肠癌、宫颈癌、神经母细胞瘤的作用进行了广泛的研究，大量研究证明，EB1089能够在体外、体内抑制多种肿瘤细胞增长。然而，有关EB1089对胰腺癌的作用及其机制研究的报道却比较少见。 胰腺癌的增殖、浸润、转移都与肿瘤细胞周期本身的生物学特性密切相关，pl作为细胞周期依赖性激酶抑制物其表达常使细胞静止于GO／G；期，来参与细胞周期的调控。本研究通过测定人胰腺癌细胞系 BxPC－3在应用 EB1089后 PZI表达情况，作为人胰腺癌细胞系的生长和细胞周期调控的一个检测指标，在体外实验中一定程度上反映EB1089对胰腺癌细胞的生长抑制和分化诱导作用。用west，rn bZot法检测nl蛋白的表达，此方法优点是敏感、特异而且半定量，是基因过量表达检测的一个重要应用。 目 的 本研究观察EB1089对胰腺癌细胞株BrkC—3的生长抑制作用，并探讨其抑制胰腺癌生长，使细胞周期向G／G；期转化，检测细胞周期依赖性激酶抑制物P21的表达，以明确EB1089对胰腺癌的生长抑制作用，同时探讨其机理，为胰腺癌的治疗提供理论依据。 实验材料与方法 一、实验方法 1．细胞培养及给要处理： 1．1 细胞系：BxPC－3购自中科院来源于美国组织培养库Amencan Tissue Type Cul咖 Collection（ATCC）。 1．2 施加药物：EB1089是 Christina Mrpr k Hansen，M．Sc．药 ·2·业公司产品。－20℃避光保存，应用时用二甲基亚巩（DMSO）和RPMll640稀释。 1．3 细胞培养：BxPC－3细胞培养于 37℃含 5％COZ的培养箱中，nyMll640培养液（Gibico，UK）中含10％胎牛血清上 NaH－CO卜8万单位八000Inl庆大霉素，细胞单层贴壁生长，每3大传代一次。 2．EB1089对胰腺癌细胞生长抑制作用的测定： MTh比色法计算胰腺癌细胞的生长抑制率。 3．流式细胞仪分析细胞周期。 应用不同浓度的EB1089作用BxPC－3，通过碘化丙院（P）染色法，在BeckmaheDickinson FACScan流式细胞仪上观察细胞周期的改变。 4·Western Blotting法检测PZI蛋白的表达 收集药物不同浓度和不同作用时间段的 BxPC－3细胞，经提取胰腺癌细胞系蛋白、酚试剂法蛋白定量、通过SDS一聚丙烯酸胺凝胶电泳、硝酸纤维素膜转印、抗体作用发光成像，分析蛋白的光密度值。 5。统计学处理。 各组数值采用均数。标准差，组间比较采用单项方差分析。 实验结果 1．EB1089对BxPC－3细胞的生长抑制作用： EB1089对用药组BxPC－3细胞系有明显的生长抑制作用，其抑制作用呈现剂量依赖方式。50％细胞生长抑制浓度问C。＊约为 10－’M。所以我们选择此浓度作为下一步对细胞周期研究的用药浓度。 2．细胞周期分析： ·3· 流式细胞仪检测发现：对照组细胞各周期比例分别为人期48％，S期 17％，民十M期 5％。用药后 G；期细胞比例明显增加，产生细胞周期阻滞作用。 3．PZI表达的测定： Western Blotting法检测显示，经EB1089作用后，胰腺癌 PZI蛋白的表达随EB1089的作用时间的延长和药物浓度的提高而增强。 结 论 EB1089对于胰腺癌细胞系SXPC－3有明显的生长抑制作用，同时，EB10”起到了细胞周期阻滞作用，引起EBm89的细胞周期抑制物论I表达的上调。由于”j上阔而引起的胰腺癌细胞系的生长抑制可能是其抗肿瘤机制之一。因此，EB1089有可能