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第一部分载酞菁锌靶向新生血管相变纳米粒的制备及其特性研究目的制备一种搭载酞菁锌(ZnPc)和全氟己烷(PFH)的新型靶向新生血管诊疗一体化分子探针,检测其一般理化特性,ZnPc包载率,光热效应以及光致相变(ODV)能力。方法采用双乳化法制备搭载ZnPc和PFH的PLGA高分子聚合物纳米粒(PLGA@ZnPc@PFH);然后通过碳二亚胺法将PLGA@ZnPc@PFH与抗血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)抗体相偶联,制备出靶向新生血管的多功能纳米粒(V-PLGA@ZnPc@PFH)。检测其粒径,电位,结构以及光吸收特性等一般理化性质;绘制ZnPc的标准曲线,计算出V-PLGA@ZnPc@PFH纳米粒中ZnPc的包载率;采用激光共聚焦显微镜及流式细胞仪检测PLGA@ZnPc@PFH与VEGFR-2抗体的连接情况;采用近红外激光辐照(660 nm,0.5 W/cm2,10 min)不同浓度(0.5,1.0,2.5,5.0 mg/m L)的PLGA@ZnPc@PFH,热成像仪和光学显微镜观察PLGA@ZnPc@PFH的光热效应以及ODV能力;PLGA@PFH设置为对照组。1结果所制备的V-PLGA@ZnPc@PFH,其粒径为256.4±57.1 nm,电位为-25.4±5.0 m V;透射电镜(TEM)观察到纳米粒呈球形,粒径大小及分布均一;紫外分光光度计检测纳米粒在波长600~680 nm区域具有较强的光吸收能力;根据绘制的ZnPc的标准曲线,计算得出其包载率为83.5±3.7%;激光共聚焦显微镜观察到PLGA@ZnPc@PFH与VEGFR-2抗体成功偶联,流式细胞仪检测其连接率为82.7±2.0%。PLGA@ZnPc@PFH在经近红外激光辐照过程中,其温度随着辐照时间延长而逐渐升高,且其最高温度与纳米粒的浓度呈正相关(r=0.9908,P<0.05);辐照后,在光学显微镜下观察到纳米粒发生了相变。而PLGA@PFH的温度在辐照过程中没有明显变化,也没有观察到有相变发生。结论成功制备出搭载ZnPc和PFH靶向新生血管的多功能纳米粒(V-PLGA@ZnPc@PFH),其形态规则呈球形,粒径大小及分布均一,与VEGFR-2抗体连接率高,具有良好的光热效应及光致相变能力,为进一步进行体外光声/超声双模态显像,靶向能力的评估以及光热治疗奠定了的基础。第二部分载酞菁锌靶向新生血管相变纳米粒体外寻靶,双模态显像以及光热治疗研究目的检测纳米粒体外光声/超声双模态显像能力,评价其细胞毒性,靶向能力以及光热治疗效果。方法采用光声成像仪观察不同浓度(0.5,1.0,2.5,5.0 mg/m L)的PLGA@ZnPc@PFH增强光声显像效果;并在经近红外激光辐照(660nm,0.5 W/cm2,10 min)不同浓度(0.5,1.0,2.5,5.0 mg/m L)的PLGA@ZnPc@PFH后,彩色多普勒超声诊断仪观察其增强超声显像效果;PLGA@PFH作为对照组;采集光声/超声图像后,分析图像感兴趣区域的信号强度,评价纳米粒体外双模态显影效果。采用CCK-8法检测V-PLGA@ZnPc@PFH的细胞毒性。制备Di I标记的V-PLGA@ZnPc@PFH,激光共聚焦显微镜观察及流式细胞仪检测V-PLGA@ZnPc@PFH与体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的结合情况,并设置非靶向组(PLGA@ZnPc@PFH)及游离抗体封闭受体组进行对照,评价纳米粒体外靶向能力。将靶向纳米粒(V-PLGA@ZnPc@PFH)和非靶向纳米粒(PLGA@ZnPc@PFH)分别与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)孵育2 h,然后除去未与细胞结合的纳米粒,采用近红外激光辐照细胞(660 nm,0.5 W/cm2,10 min)后孵育24 h,设置单纯激光辐照组为对照组;流式细胞仪检测细胞凋亡情况,评价纳米粒光热治疗效果。结果光声成像仪观察到PLGA@ZnPc@PFH能够增强光声显像,并且在经近红外激光辐照后能够增强超声显像,且光声及超声信号强度与纳米粒浓度呈正相关(P<0.05);而PLGA@PFH未见光声或者增强超声信号。CCK-8检测结果显示人脐静脉内皮细胞在含有不同浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mg/m L)V-PLGA@ZnPc@PFH的培养液中孵育24 h后,细胞的活力分别为0.975±0.031%,0.950±0.078%,0.948±0.073%,0.946±0.073%,0.942±0.084%,提示纳米粒对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)没有明显的细胞毒性(F=0.402,P>0.05)。激光共聚焦显微镜下观察到靶向组纳米粒(V-PLGA@ZnPc@PFH)呈环状围绕在细胞表面,而非靶向组(PLGA@ZnPc@PFH)和游离抗体封闭组仅见少许纳米粒与HUVECs结合;流式细胞仪检测纳米粒与细胞结合的情况与激光共聚焦显微镜观察的结果一致,靶向组的结合率明显高于非靶向组(q=40.21,P<0.05)和游离抗体封闭组(q=30.91,P<0.05)。流式细胞仪检测到在单纯激光组与阴性对照组中细胞凋亡比例可以忽略不计(<10%)且两组差异无统计学意义(q=0.7041,P>0.05),靶向组细胞凋亡比例明显高于非靶向组(q=53.30,P<0.05),说明单纯激光辐照不会引起细胞凋亡,靶向组的光热治疗效率明显高于非靶向组。结论所制备的V-PLGA@ZnPc@PFH具有良好的生物安全性和体外靶向能力,具备光声/超声双模态显像以及光热治疗的能力,为进一步在体内进行实验研究奠定了的基础。