【摘 要】
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目的:探讨MCPIP1是否介导MCP-1诱导的VSMC增殖。方法:培养并鉴定人血管平滑肌细胞(hVSMC);用1、10、100ng/mL MCP-1分别作用VSMC24h;用100ng/mL MCP-1分别作用VSMC1、4、8、12
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目的:探讨MCPIP1是否介导MCP-1诱导的VSMC增殖。方法:培养并鉴定人血管平滑肌细胞(hVSMC);用1、10、100ng/mL MCP-1分别作用VSMC24h;用100ng/mL MCP-1分别作用VSMC1、4、8、12、24h后,Real-time PCR检测MCPIP1mRNA转录情况;Western blot检测MCPIPl蛋白表达。用MCPIP siRNA沉默hVSMC中MCPIPl基因,检测转染效率,选取最佳转染条件进行下述实验:沉默MCPIP1基因后,用100ng/mL MCP-1作用VSMC,用细胞计数板记录细胞数量变化;CCK-8试剂盒检测细胞活力的变化;用EdU试剂盒检测VSMC DNA合成率;流式细胞术检测S期细胞数量;100ng/mL MCP-1或20ng/mLPDGF-BB作用VSMC后,c-fos基因mRNA的转录。结果:1、10、100ng/mL MCP-1均能诱导VSMC中MCPIP1mRNA和蛋白的表达,存在剂量依赖效应。100ng/mL MCP-1作用VSMC4h后,与对照组相比,MCPIP1表达有明显差异(P<0.01);随着时间延长,MCPIP1表达水平逐渐升高,作用24h后表达最高,存在时间依赖效应。用含MCPIP siRNA的转染试剂2μL转染VSMC效果最佳,MCPIPl基因沉默效率可达46%。VSMC中MCPIP1基因沉默后,用100ng/mL MCP-1作用,与MCP-1单独作用组比较,细胞数量明显降低(P<0.01);细胞活力明显降低(P<0.05)。用EdU标记后倒置显微镜下观察发现,siRNA干扰组与MCP-1组比较,VSMC的DNA合成率降低(P<0.01);FCM检测siRNA干扰组VSMC的S期细胞数量下降,与MCP-1组比较差异明显(P<0.05)。沉默MCPIP1基因后,Real-time PCR检测MCP-1、PDGF-BB所诱导VSMC中c-fos基因表达下调,与阳性对照组比较差异明显(P<0.01,P<0.01)。结论:MCPIP1介导MCP-1诱导的VSMC增殖,与诱导c-fos表达有关。
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